[发明专利]一种溶栓腐乳毛坯的制备方法

权利要求书

1.一种溶栓腐乳毛坯的制备方法，其特征在于，其中所使用纳豆菌HT8保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号CGMCC7168，毛霉从忠县忠州腐乳毛坯中分离获得，包括如下步骤：

步骤一、豆腐白坯的制作：将选取的大豆经浸泡、磨浆、滤浆、煮浆、点浆、蹲脑、压榨降温、切坯处理，制得豆腐白坯；泡豆水温在20℃-25℃，时间3-8h，压榨至豆腐坯含水量在65-70％，厚薄均匀，压榨成型后切成(2.8×2.8×1.7cm)的小块；

步骤二、菌种活化：将斜面保藏毛霉菌种于无菌操作下接种到PDA斜面培养基，于恒温培养箱18-20℃培养72h，于冰箱中保存备用；吸取100ul保藏的纳豆菌HT8菌种到10mlLB培养基，37℃，200r/min培养12h，于冰箱保存备用；

步骤三、毛霉种子液的制备：将活化的毛霉斜面菌种加入适量的无菌生理盐水水，用移液器吸取适量菌液，接种于麸皮培养基，20℃下培养96h，至三角瓶内鼓皮长满菌丝和灰色孢子后取出备用；在培养好的种曲培养瓶中加入500ml灭菌生理盐水充分摇匀，双层纱布过滤，滤渣再加500ml灭菌生理盐水洗涤一次过滤，两次滤液混合制成孢子悬液；将此孢子悬浮液置于4℃冰箱中，作为菌种保存；

步骤四、细菌种子液的制备：取200ul的活化HT8菌种到20ml液体种子培养基，37℃，200r/min培养18h；

步骤五、接种：将纳豆菌HT8菌种和毛霉按50-70∶1的比例接种；

步骤六、培养：在18℃，湿度为85％-90％的条件下培养80-100h，即得溶栓腐乳毛坯。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤二中LB培养基为：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，磷酸二氢钾1g/L及余量的水。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤五中接种方式为喷雾或者豆腐坯浸泡菌液的方法进行。