[发明专利]TAT-凋亡素基因修饰T细胞的方法在审
| 申请号： | 201310682958.9 | 申请日： | 2013-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN104059886A | 公开（公告）日： | 2014-09-24 |
| 发明（设计）人： | 陆玲玲;张俊红;叶永清;苏国新 | 申请（专利权）人： | 上海柯莱逊生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/861 |
| 代理公司： | 上海三方专利事务所 31127 | 代理人： | 吴干权;钱品兴 |
| 地址： | 201201 上海市浦东新区张江*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | tat 凋亡素 基因 修饰 细胞 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种TAT-凋亡素基因修饰T细胞的方法，其特征在于由如下步骤组成：
a.将TAT-凋亡素基因从pUC57-TAT-apoptin中亚克隆至Ad5/F35MaxTM系统的穿梭载体pDC316中，构建穿梭质粒pDC316-TAT-凋亡素；
b.将所述pDC316-TAT-凋亡素与pBHG-fiber5/35骨架质粒运用脂质体法共转染293细胞，通过Cre/loxP系统作用发生定点重组获得含有TAT-凋亡素Ad5/F35-TAT-凋亡素重组腺病毒；
c.将所述Ad5/F35-TAT-凋亡素重组腺病毒通过倍比扩增，富集病毒感染T细胞，获得含有TAT-凋亡素基因修饰的T细胞。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的TAT的编码序列位于TAT-凋亡素融合蛋白序列的N-端，能有效将融合蛋白导入肿瘤细胞中。
3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于所述TAT-凋亡素基因连接于pDC316腺病毒穿梭质粒的U6启动子之下。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述定点重组为pBHG-fiber5/35骨架质粒与带有loxP位点的腺病毒穿梭质粒pDC316配合，利用Cre/loxP系统的作用在293细胞内发生的定点重组。
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