[发明专利]一种检测Notch信号通路的试剂、PCR检测方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，尤其涉及一种检测Notch信号通路的试剂、PCR检测方法及其应用。

背景技术

Notch信号是一种遗传进化上高度保守，反映相邻细胞间通信作用的一种信号通路，其不仅在细胞正常发育、分化增殖和凋亡中起着重要的作用，而且与多种肿瘤的发生和发展具有相关性。

Notch信号通路由跨膜的受体、配体和核内结合蛋白及靶基因组成，Notch受体包括Notch细胞外结构域和跨膜区/Notch细胞内结构域，是具有细胞表面受体和核内转录调控双重功能的单链跨膜蛋白。目前发现在哺育动物有4种Notch受体，即Notch-l、Notch-2、Notch-3和Notch-4，它们通常由相邻细胞的Notch配体相互触发而活化。Notch配体也是表达于细胞表面的单链跨膜蛋白，在果蝇中被命名为Delta和Serrate，在线虫中被命名为Lag-2，因此Notch配体又名DSL（Delta/Serrate/Lag-2）蛋白。DSL高度保守，哺乳动物中与Delta高度同源的配体被称为Delta或Delta样（Delta-like，DLL），与Serrate高度同源的被称为Serrate或Jagged，即5种配体分别为Delta-1、Delta-3、Delta-4、Jagged-1和Jagged-2，在与相邻细胞Notch受体的结合及活化过程中具有关键性作用。当Notch受体被相应的配体触发并与其DSL结构域结合，经过γ-分泌酶等介导的2次蛋白酶切后，Notch受体的活化形式—具有核定位信号的NICD被释放入细胞质中，并易位转移入细胞核，通过与转录因子结合，发挥对靶基因的调控作用。

肿瘤的发生和发展是许多因素共同作用的结果。近年来越来越多的证据显示，Notch信号通路除了与多种实体瘤的发生和发展有关外，在肠道中激活的Notch信号通路可能通过促进肿瘤干细胞增殖而形成肠肿瘤，表明Notch信号在消化系统肿瘤的形成中也起到十分关键的作用，并在同一种肿瘤的不同类型或不同发展阶段中扮演着不同的角色，既可表现为致瘤性，又可表现为抑癌性。

尽管Notch信号在生命起源的过程中发挥着重要的作用，在少数肿瘤中也表现出抑癌性，但是异常的Notch信号与肿瘤的发生和发展有着千丝万缕的联系，对Notch信号与相关疾病，特别是与肿瘤之间的分子机制，有待进一步加以说明。最大限度地发挥Notch信号通路抑癌基因的作用和开发以Notch信号通路为靶点的新药具有广阔的应用前景，也将为肿瘤治疗开辟新的途径。

发明内容

本发明针对现有技术中如何确定NOTCH核心信号分子的调控，如何解释核心分子在肿瘤细胞中的变化的困难，提供了一种检测Notch信号通路的试剂和PCR检测方法，本发明将涉及细胞凋亡的信号分子集中在一个平板上，通过做一次实时荧光定量PCR反应，反应细胞的生存状态，探讨在乳腺癌细胞系中引起NOTCH信号通路变化的可能靶分子与靶途径，为研究核心NOTCH信号蛋白的调节提供最直接的证据。

为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：

一种检测Notch信号通路的试剂，它包括以下引物：

（1）检测ADAM10基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-ATGGGAGGTCAGTATGGGAAT-3'；

5'-ACTGCTCTTTTGGCACGC-3'；

（2）检测ADAM17基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-ATGTTTCACGTTTGCAGTCTC-3'；

5'-AGAAGCGATGATCTGCTACC-3'；

（3）检测AES基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-ACCCCAGCAACTCAAATTCA-3'；

5'-AAGCCGTAGGACATCTCGTA-3'；

（4）检测CBL基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-TGGTGCGGTTGTGTCAGA-3'；

5'-GGTAGGTATCTGGTAGCAGG-3'；

（5）检测CCND1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-GCTGCGAAGTGGAAACCAT-3'；

5'-CCTCCTTCTGCACACATTTGA-3'；

（6）检测CD44基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-CCCATCCCAGACGAAGACA-3'；

5'-GCCATTTGTGTTGTTGTGTGA-3'；