[发明专利]大豆南方茎溃疡病菌的检测靶标及其LAMP引物组合物和应用

权利要求书

1.大豆南方茎溃疡病菌的检测靶标序列Tef1-α，其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.SEQ ID NO.1所示的大豆南方茎溃疡病菌的检测靶标序列Tef1-α在检测或鉴定大豆南方茎溃疡病菌中的应用。

3.针对权利要求1所述的大豆南方茎溃疡病菌的检测靶标序列Tef1-α设计的特异性的LAMP引物组合物，其特征在于包括正向内引物FIP如SEQ ID NO.2所示，反向内引物BIP如SEQ ID NO.3所示，正向外引物F3如SEQ ID NO.4所示，反向外引物B3如SEQ ID NO.5所示。

4.权利要求3所述的特异性的LAMP引物组合物在制备检测或鉴定大豆南方茎溃疡病菌的试剂中的应用。

5.一种用于检测大大豆南方茎溃疡病菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于包含权利要求3所述的特异性的LAMP引物组合物。

6.根据权利要求5所述的用于检测大豆南方茎溃疡病菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于所述的试剂盒包含：由20mM正向内引物FIP、20mM反向内引物BIP，10mM正向外引物F3、10mM反向外引物B3，10%10xThermoPol Reaction Buffer、50mM MgSO₄、10mMdNTP Mixture、5M甜菜碱、8000U/mLBst DNA Polymerase Large fragment及超纯水组成的检测溶液。

7.一种检测大豆南方茎溃疡病菌的方法，其特征在于提取待检微生物的DNA，以提取的DNA为模板，利用权利要求3所述的特异性的LAMP引物组合物进行LAMP扩增反应；扩增产物加入SYBR GREENⅠ染料，在常光和/或紫外光下检测结果，如果反应产物在常光下变显黄色、在紫外光下产生强烈荧光，则表示存在大豆南方茎溃疡病菌，在常光下显橙色、紫外光下无荧光产生则表示不含该病菌。

8.根据权利要求7所述的检测大豆南方茎溃疡病菌的方法，其特征在于提取待检微生物的DNA，取3μl DNA溶液，加入19.5μl权利要求6所述的检测溶液和2.5μl灭菌去离子水进行LAMP反应，反应程序为：64℃70min；增产物加入SYBR GREENⅠ染料，在紫外光下检测结果，如果反应产物产生强烈荧光，则表示存在大豆南方茎溃疡病菌，无荧光产生则表示不含该病菌。