[发明专利]一种抗肿瘤淋巴细胞的鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学领域，尤其涉及的是一种抗肿瘤淋巴细胞的鉴定方法。 

背景技术

环境污染和遗传因素会导致DNA和基因的突变，癌细胞起源于人体内细胞由于DNA突变和损伤的无控制生长。通常，癌细胞生长形成肿瘤，癌细胞还会转移到别处继续生长，从而破坏正常的组织器官，导致病人的死亡。 

癌症已成为常见病、多发病。据2008年的统计数据，全球有新发癌症病例1266万，死亡800万，估计至2015年新发癌症病例将达到1500万之多。《2012中国肿瘤登记年报》对外发布，报道全国每6分钟就有一人被确诊为癌症，每天有8550人成为癌症患者，每七到八人中就有一人死于癌症。全国癌症发病形势严峻，发病率与死亡率呈持续上升趋势，每年新发癌症病例约350万，因癌症死亡约250万。伴随着对空气中弥漫的PM2.5的不安，这一连串灰色的数字令中国人对癌症的认知绷得更紧了。 

目前癌症是继心血管之后的第二位导致人类死亡的因素，大约一半的男人和三分之一多的女人会产生癌症。我国居民一生罹患癌症的概率为22％，癌症已成为人类第一杀手。目前，还没有很有效的办法来对付癌症，特别是晚期癌症病人的治疗。20世纪以来，以手术治疗、放射治疗和化学治疗三大常规武器为治疗和康复做出巨大的贡献，但这些传统治疗手段均有其局限性，在癌症治疗中未能取得整体满意效果。比如手术治疗，只适合大约20％的较早期的癌患者，有一部分手术治疗可以获得满意的根治效果，遗憾的是这样的情况实在是少数，大部分病例不适合手术治疗。化疗是双刃剑，全身化疗，毒副作用大，少数病种可以获得根治效果，但大部分化疗只是姑息或辅助效果，盲目化疗 无益生活质量提高，甚至因为化疗导致并发症而增加身体和经济负担。为了根治癌症，迫切需要找到一种有效的治疗癌症的办法。 

肿瘤的免疫治疗是一种新兴的、具有显著疗效的肿瘤治疗模式，是一种自身免疫抗癌的新型生物技术治疗方法。它是运用生物技术和生物制剂对从病人体内采集的免疫细胞进行体外培养和扩增后回输到病人体内的方法，来激发，增强机体自身免疫功能，从而达到治疗肿瘤的目的。肿瘤的免疫治疗是继手术、放疗和化疗之后的第四大肿瘤治疗技术。 

利用特异的杀伤性淋巴细胞进行肿瘤免疫治疗起源于八十年代，利用抗肿瘤的淋巴细胞进行肿瘤免疫治疗是一种特异、有效而先进的癌症治疗手段。近年来，这一技术在皮肤癌晚期病人的治疗上得到成功的应用。临床试验证明，四分之三的皮肤癌晚期病人经过治疗后癌症肿块明显消退，一半的皮肤癌晚期病人完全康复。因此，利用抗肿瘤的淋巴细胞进行肿瘤细胞免疫治疗是一种非常有效的癌症治疗新技术，有着广阔的应用前景。 

利用特异的杀伤性淋巴细胞进行肿瘤免疫治疗的过程包括肿瘤组织样品的取得，从肿瘤样品中分离肿瘤杀伤性淋巴细胞，肿瘤杀伤性淋巴细胞的大量扩增和活化，肿瘤杀伤性淋巴细胞输入癌症病人和临床效果的观察。肿瘤杀伤性淋巴细胞的分离是关键。对从皮肤癌症病人分离肿瘤杀伤性淋巴细胞已进行了大量的研究，并取得了很好的效果，可以从百分之八十以上的皮肤癌症病人分离得到肿瘤杀伤性淋巴细胞。研究显示，也可以从其他癌症病人患者分离得到肿瘤杀伤性淋巴细胞。因此，肿瘤杀伤性淋巴细胞的肿瘤免疫治疗也可以应用于其他癌症病人。 

肿瘤免疫治疗的关键是从癌症病人体内分离、鉴定肿瘤杀伤性淋巴细胞。通常，从癌症病人中切除一小块肿瘤组织，经过7-10天的刺激和培养，得到几百万的肿瘤浸润性淋巴细胞。然后，进行肿瘤浸润性淋巴细胞和肿瘤细胞的共培养。二十四小时后，利用酶联免疫测定法检测淋巴细胞是否释放γ干扰素，从而确定淋巴细胞是否具有肿瘤杀伤性。这种经典的鉴定肿瘤杀伤性淋巴细胞的方法，耗时较长，而且需要肿瘤细胞作为靶细胞。往往从癌症病人肿瘤组织中诱导培养原代肿瘤细胞，非常困难。所以，迫切需 要简易快速的方法来鉴定来自癌症病人的肿瘤杀伤性淋巴细胞，以便有效地用于肿瘤的免疫治疗。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供了一种抗肿瘤淋巴细胞的鉴定方法。 

本发明的技术方案如下： 

一种抗肿瘤淋巴细胞的鉴定方法，包括以下步骤： 

(1)取0.5厘米大小的癌症病人的肿瘤组织块，在生物安全柜中用手术刀将其切成1毫米见方的肿瘤组织小块； 

(2)将肿瘤组织放于24孔培养板，添加RPMI-1640培养基和白细胞介素-2，然后将24孔培养板置于37℃和5％CO2培养箱中培养；