[发明专利]食管癌相关肽和热休克蛋白形成的复合物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及食管癌抗原多肽与热休克蛋白gp96和HSP78的复合物以及它们抗食管癌的用途。

背景技术

食管癌在我国每年发病和死亡人数都占全球人数一半以上，是最具中国特色的恶性肿瘤之一，年发病率超过22/10⁵。在我国，食管癌以食管鳞癌为主，占95%以上。由于食管癌早期症状不典型, 50%的患者在诊断时已为晚期。食管癌手术后仍有近90%的患者术后复发转移，术后5年生存率仅维持在30%左右，年死亡率超过16/10⁵。

化疗是常规治疗手段，然而食管癌对目前的化疗药物多为中度或低度敏感，加之食管癌多数为分化程度差异较大的鳞癌细胞，以及抗药性存在等因素，使食管癌化疗效果较难提高。标准治疗方案顺铂联合5-FU的方案完全缓解也是很少见的，中位缓解时间通常很短。

近年来，靶向治疗已成为肿瘤治疗热点。然而由于肿瘤差异性比较大，靶向药物的疗效不均一，同时，靶向药物还存在耐药性的问题，且食管癌发生地多为贫穷地区，靶向药物的昂贵费用也让患者望而却步。

近年来，免疫治疗作为第四大肿瘤治疗模式已成研究热点。在临床上食管鳞癌组织中检测到gp96的高表达，表达水平和肿瘤预后呈正相关。小鼠成瘤实验中也证实在已成形的鳞状食管癌细胞系瘤体中注射自体gp96可以明显减慢肿瘤的生长，gp96可以激起更强的肿瘤特异性杀伤。我们的临床试验也表明食管癌患者皮下免疫自体肿瘤gp96复合物可以增强患者肿瘤特异性的CTL反应。因此，热休克蛋白gp96治疗食管癌极有可能取得非常好的疗效。

gp96是热休克蛋白HSP90家族中的重要成员，主要定位于内质网腔(Endoplasmic Reticulum)，在正常组织和肿瘤中均有广泛表达。正常情况下gp96在细胞中呈低水平表达，而热休克、葡萄糖缺乏、细菌和病毒感染等均可增加其表达。在细胞内gp96作为分子伴侣蛋白，可阻止蛋白质聚集，协助蛋白质折叠、伸展、组装和转运，抑制错折叠蛋白质的分泌。gp96分子具有多肽结合的能力，能结合5-25个氨基酸的多肽序列。热休克蛋白HSP78是细胞质中HSP70家族中的成员，分子量约78kDa。HSP78分子作为分子伴侣能与细胞中各种短肽结合。

在细胞外，gp96可作为呈递分子将结合的短肽呈递给I类MHC分子，激活特异性和记忆性T细胞，引发机体细胞免疫反应。因此HSP本身不具备抗原性，所结合的短肽决定了复合物的抗原性。gp96还可以活化树突细胞（DC)促进MHC I类和MHC II类分子以及共刺激因子的表达，从而提高免疫反应。

目前已证实gp96和hsp78分子可以结合多种结合抗原多肽,包括泡状口炎病毒抗原区肽、小鼠H-2Kb限制的卵清蛋白抗原表位肽、H-2La限制的白血病表位肽、乙肝病毒抗原肽等。但目前为止未见从食管癌患者肿瘤组织中分离鉴定与HSP结合的抗原多肽。

食管癌是严重的消化系统恶性肿瘤。前期的动物试验和临床试验显示，自体gp96治疗食管癌应该会有不错的效果。然而，由于食管解剖结构的特殊性，组织大小是限于这种治疗方法应用的一个关键，同时疫苗制备具有一次性的特点，能够完成有效疗程的患者有限，gp96免疫治疗食管癌仍存在很多不足。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题是筛选能激活食管癌特异性T细胞的肽段。克服肿瘤细胞免疫编辑导致的低免疫原性，能够在健康个体及食管癌患者中诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(杀伤性T细胞，CTL)，而且CTL具有强大的抗食管癌作用，对正常细胞及组织无破坏作用。

本发明的一个目的是提供一种与gp96和HSP78结合的食管癌抗原的复合物。所述的食管癌抗原可以分别是食管癌肿瘤抗原MAGE-A4蛋白上第49-57位的氨基酸序列，其序列可以是GTLEEVPAA，或其变异序列；食管癌肿瘤抗原MAGE-A4蛋白上第24-32位的氨基酸序列，其序列可以是GLVGAQAPT，或其变异序列；食管癌肿瘤抗原MAGE-A4蛋白上第202-210位的氨基酸序列，其序列可以是LLIIVLGTI，或其变异序列；食管癌肿瘤抗原MAGE-A4蛋白上第46-54位的氨基酸序列，其序列可以是LVPGTLEEV，或其变异序列；食管癌肿瘤抗原NY-ESO-1蛋白上第71-79位的氨基酸序列，其序列可以是GLNGCCRCG，或其变异序列；食管癌肿瘤抗原NY-ESO-1蛋白上第124-132位的氨基酸序列，其序列可以是KEFTVSGNI，或其变异序列。