[发明专利]转基因油菜籽MS8品系的LAMP检测试剂及检测方法有效
申请号: | 201310694723.1 | 申请日: | 2013-12-17 |
公开(公告)号: | CN103695544A | 公开(公告)日: | 2014-04-02 |
发明(设计)人: | 黄素文;张吉红;王建峰;倪健波;李如松 | 申请(专利权)人: | 宁波检验检疫科学技术研究院 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 宁波奥圣专利代理事务所(普通合伙) 33226 | 代理人: | 程晓明 |
地址: | 315012 *** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 转基因 油菜籽 ms8 品系 lamp 检测 试剂 方法 | ||
1.转基因油菜籽MS8品系的LAMP检测试剂,包括2×LAMP反应缓冲液、Bst DNA聚合酶和特异性引物,其特征在于所述特异性引物的核苷酸序列分别为:
F3:TCGAATCATA TTCGTACTGT AGT
B3:AAAACCTCTC TTTGTAGAAA CA
FIP:GCCACTCGAA GGACAAATTT TAAAATTTTT ATGATCAAAG CGTCCTCA
BIP:AAGTGTCAAA CTCTCATCCA AACATTTTAT GCCATTTAGT TAACTAGTTG A
LF:TGCTGTGGCC CATAAACCT。
2.利用权利要求1所述的转基因油菜籽MS8品系的LAMP检测试剂检测转基因油菜籽MS8品系的方法,其特征在于步骤如下:
A、DNA提取:油菜籽样品粉末用DNA提取试剂盒提取,得到DNA模板,具体依DNA提取试剂盒说明书进行;
B、LAMP检测:25μL反应体系为2×LAMP反应缓冲液12.5μL,浓度为8U/μLBst DNA聚合酶1.5μL,浓度都为20μmol/L的引物F3和B3各为0.2μL,浓度为20μmol/L的引物LF为0.8μL,浓度都为20μmol/L的引物BIP和FIP各为1.6μL,DNA模板2.0μL,余量为双蒸水;LAMP反应条件为反应管在61℃恒温水浴锅中扩增1h,扩增结束后,8000r/min室温离心1min,染色剂SYBR Green I与扩增产物充分混合,反应管内颜色若变为绿色,则为转基因油菜籽MS8品系。
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