[发明专利]一种催化效率提高的葡萄糖氧化酶

权利要求书

1.一种葡萄糖氧化酶突变体，是以SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列为出发序列，将催化活性中心的甲硫氨酸突变为亮氨酸。 

2.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶突变体，其特征在于，是将第524位的甲硫氨酸M突变为亮氨酸L，突变后的葡萄糖氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。 

3.编码权利要求2所述葡萄糖氧化酶突变体的核苷酸。 

4.携带权利要求3所述核苷酸的载体、基因工程菌或转基因细胞系。 

5.根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，是以毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115为宿主，以pPIC9K为载体，表达编码所述葡萄糖氧化酶突变体的基因。 

6.构建权利要求5所述基因工程菌的方法，其特征在于，是通过PCR或化学合成得到编码突变体的核苷酸序列，连接表达载体pPIC9K获得重组质粒，将重组质粒转化P.pastoris GS115，获得基因工程菌。 

7.应用权利要求5所述基因工程菌发酵生产葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将携带突变基因的基因工程菌活化后，在30℃、200rpm下培养至OD₆₀₀=1.6-1.7，作为种子液；（2）将种子液以2%的接种量转入基本发酵培养基，于30℃、200rpm条件下发酵培养；（3）当在基本发酵培养基中培养至OD₆₀₀=1.2-1.5时，收集菌体，将酵母细胞转入诱导培养基中诱导蛋白的产生。 

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述基本发酵培养基为：胰蛋白胨20g/L，酵母抽提物10g/L，甘油10mL/L，YNB13.4g/L，100mM/L pH6.0的磷酸缓冲液。 

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述诱导培养基为：胰蛋白胨20g/L，酵母抽提物10g/L，甲醇8mL/L，YNB13.4g/L，100mM/L pH6.0的磷酸缓冲液。 

10.权利要求1所述葡萄糖氧化酶突变体的应用。