[发明专利]抗传染性造血器官坏死病毒的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体涉及一种抗传染性造血器官坏死病毒的单克隆抗体，杂交瘤细胞株及其建立一种检测传染性造血器官坏死病毒的夹心ELISA方法试剂盒。

背景技术

传染性造血器官坏死病毒(Infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)在分类上属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)，粒外弹状病毒属(Novirhabdovirus)。主要感染虹鳟、硬头鳟等冷水鱼类，急性感染时累计死亡率在90-95%以上，并可垂直传播给子代。最早流行于北美和欧洲一些国家，随着水产品贸易的发展不断传播开来，目前已经蔓延至我国东北、河北、山东、北京、甘肃、青海等主要冷水鱼养殖地区，并在局部地区暴发流行，造成较大经济损失。IHN被国际兽疫局(OIE)列为必须申报的疾病，是鱼类口岸第1类检疫对象，被我国列为二类动物疫病。

该病目前尚无治疗方法，防控IHN的最现实有效措施是对跨区域运输的鱼苗和亲鱼隔离并进行连续有效的监测，发现病毒尽快找到源头，控制并消除病原，控制病毒的传播。目前OIE推荐的几种IHNV的诊断方法包括细胞培养分离方法、免疫学方法（中和试验法、间接荧光抗体法和ELISA法）和分子生物学方法（PCR法、PCR探针和序列测定法）。其中细胞培养分离技术准确度较高，但检测周期较长，至少需要15日才能得到最终的结果，不能满足快速检测的需要；分子生物学方法基于细胞分离方法的基础上，用于检测细胞培养后的病毒，或是对显性感染鱼携带的病毒做进一步的确认；基于单克隆抗体技术的免疫学检测技术，是满足基层实验室快速大批量检测IHNV的有效途径，已有报道，或是没有好的抗原和抗血清，或是需要较为昂贵的精密仪器，不适合基层实验室，一直没能大规模的应用到疾病的监测工作中。因此，获得具有较强特异性的抗传染性造血器官坏死病毒的单克隆抗体，不仅具有快速、灵敏的特点，而且操作简单，对仪器设备要求低，简便快捷，适用于该病的大规模监测。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种抗传染性造血器官坏死病毒的单克隆抗体及其应用。

为解决上述技术问题，本发明采用下述技术方案：

本发明经筛选得到了能稳定分泌抗传染性造血器官坏死病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株IHNV-1B10，该杂交瘤细胞株的分类命名为传染性造血器官坏死病毒的杂交瘤细胞株，其已于2013年12月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.8556。

由上述杂交瘤细胞株分泌的抗传染性造血器官坏死病毒的单克隆抗体也属于本发明的保护范围。

本发明还提供了一种检测传染性造血器官坏死病毒的ELISA试剂盒，该试剂盒包括本发明所述的单克隆抗体。进一步地，该试剂盒中还包括已包被抗传染性造血器官坏死病毒的多克隆抗体的固相载体，辣根过氧化酶标记的羊抗鼠抗体。

进一步地，为了便于检测，本发明试剂盒还包括阳性对照和阴性对照，以及ELISA反应所需的酶联免疫检测试剂。其中，所述阳性对照为传染性造血器官坏死病毒溶液，阴性对照为鱼类细胞悬液或者是正常鱼类组织匀浆液。所述酶联免疫检测试剂，均为常规的酶联免疫检测试剂，包括但不限于，酶的底物反应液、洗涤液和酶反应终止液。

本发明还提供了一种检测传染性造血器官坏死病毒的方法，该方法包括以下步骤：

（1）将待测样品加样于包被有抗传染性造血器官坏死病毒的多克隆抗体的固相载体；

（2）将权利要求1所述的单克隆抗体加样于（1）获得的固相载体；

（3）将辣根过氧化酶标记的羊抗鼠抗体加样于（2）获得的固相载体；

（4）加入酶的底物反应液；

（5）加入酶反应终止液；

（6）结果判定。

本发明还要求保护上述单克隆抗体在制备检测传染性造血器官坏死病毒试剂盒中的应用。以及该单克隆抗体或试剂盒在检测传染性造血器官坏死病毒中的应用。

本发明具有以下优点和效果

1、获得抗传染性造血器官坏死病的单克隆抗体及分泌该单克隆抗体杂交瘤细胞株。该杂交瘤细胞增殖后可制备大量所需的特异抗体；杂交瘤细胞注射小鼠后，产生的腹水单抗ELISA效价为1：2.5×10⁵；杂交瘤细胞株活性高，液氮中冻存8-10个月后，仍能快速复苏并保持良好活性。在所述的单克隆抗体的制备中，细胞融合率为96.2%，阳性率为93.4%。