[发明专利]狭颅田鼠DNA序列无效
申请号: | 201310701606.3 | 申请日: | 2013-12-18 |
公开(公告)号: | CN103695546A | 公开(公告)日: | 2014-04-02 |
发明(设计)人: | 张晓龙;姚李四;慈颖;乔舜;王海玲;房健慧;田丽;魏怀波 | 申请(专利权)人: | 中国检验检疫科学研究院 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/12;C12N15/11 |
代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人: | 王文君 |
地址: | 100121 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 田鼠 dna 序列 | ||
1.一种用于检测狭颅田鼠的DNA标准基因,其特征在于该基因为COI基因,具有如SEQ ID NO:1所示的基因序列。
2.一种检测权利要求1所述基因的引物,其特征在于该引物序列为:
正向引物5’ACTTCTGGGTGTCCAAAGAATCA3’;
反向引物5’CCTACTCRGCCATTTTACCTATG3’。
3.一种用于检测狭颅田鼠的试剂盒,其特征在于包括权利要求2所述的引物。
4.狭颅田鼠的分子鉴定方法,包括:
1)从待测的鼠类肝脏中分离提取DNA;
2)以该DNA为模板,采用权利要求2所述引物进行扩增;
3)鉴定扩增所得序列,如果该序列与SEQ ID NO:1的同源性在98%以上,即可判断所测田鼠为狭颅田鼠。
5.权利要求4所述的分子鉴定方法,其中步骤2)中:
采用聚合酶链式反应扩增模板。
6.权利要求4或5所述的分子鉴定方法,其中步骤3)中:
所述鉴定包括取适量步骤2)扩增出的产物用琼脂糖电泳分离,经染色剂Goldview染色后于凝胶成像系统检测,根据扩增产物的大小判定结果,如果能特异性扩增出720bp左右的条带,则进行测序分析。
7.权利要求4或5所述的分子鉴定方法,其中扩增体系为:
8.权利要求4或5所述的分子鉴定方法,其中扩增反应程序为:
预变性94℃5min,35个循环,其中变性94℃30s、退火55℃40s、延伸72℃60s,最后延伸72℃10min。
9.权利要求6所述的分子鉴定方法,其中:
取5μL PCR扩增产物,用1%琼脂糖凝胶电泳,130V电压,电泳35min,染色剂Goldview染色,凝胶成像系统检测。
10.一种快速鉴定狭颅田鼠的方法,其特征在于:
采用传统的形态学鉴定与权利要求4-9任一项所述的分子鉴定方法相结合。
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