[发明专利]黑线仓鼠DNA序列

说明书

技术领域

本发明涉及黑线仓鼠，具体涉及黑线仓鼠的DNA序列。

背景技术

黑线仓鼠（Cricetulus Barabensis）隶属于仓鼠科（Cricetidae），仓鼠亚科，仓鼠属（Cricetulus）。黑线仓鼠又名搬仓、小仓鼠、腮鼠、纹背仓鼠。国外主要分布于蒙古、俄罗斯；国内主要分布于河北、山西、内蒙古、黑龙江、吉林、辽宁、山东、江苏、安徽、河南、湖南、湖北、陕西、宁夏、甘肃等地。黑线仓鼠可以传播鼠疫、钩端螺旋体病和蜱传斑疹伤寒等疾病。同时黑线仓鼠也已在细胞遗传学、辐射遗传学、实验肿瘤和分子生物学等许多领域广泛使用。

长期以来，对鼠类的鉴定主要依靠形态学特征来实现，但近几年，随着DNA测序等技术的进步，人们陆续采用分子生物学方法对鼠类的DNA进行研究，以期建立新的分类方法，与传统分类方法相互作证。

线粒体COI基因是鼠类鉴定研究中应用最为广泛的分子标记，就目前而言，鼠类分子鉴定研究在国内研究较少，本发明意在提供一种快速鉴定黑线仓鼠的科学依据。

发明内容

本发明的目的在于提供黑线仓鼠的DNA序列。其DNA序列的获得，可为该种的快速鉴定提供科学依据。

为实现上述目的，本发明通过如下技术方案实现：

对黑河地区的黑线仓鼠分别用试剂盒提取其DNA序列，然后由合成的引物扩增其黑线仓鼠的COI基因，PCR产物序列送由专业生物公司测定。测序结果通过手工校对，并用Mega4.0软件进行相似性分析，确保所得序列为目标序列。所述黑线仓鼠的COI基因序列如SEQ ID No：1所示。

本发明提供一种用于检测黑线仓鼠的DNA标准基因，其特征在于该基因为COI基因，具有如SEQ ID NO：1所示的基因序列。

本发明还提供一种检测黑线仓鼠的DNA标准基因的引物，其特征在于该引物序列为：

正向引物5’ACTTCTGGGTGTCCAAAGAATCA3’；

反向引物5’CCTACTCRGCCATTTTACCTATG3’。

本发明还提供一种用于检测黑线仓鼠的试剂盒，其特征在于包括上述的引物。

本发明还提供一种黑线仓鼠的分子鉴定方法，包括：

1）从待测的鼠类肝脏中分离提取DNA；

2）以该DNA为模板，采用上述引物进行扩增；

3）鉴定扩增所得序列，如果该序列与SEQ ID NO：1的同源性在98%以上，即可判断所测田鼠为黑线仓鼠。

本发明还提供一种黑线仓鼠的分子鉴定方法，其中步骤2）中：

采用聚合酶链式反应扩增模板。

本发明还提供一种黑线仓鼠的分子鉴定方法，其中步骤3）中：

所述鉴定包括取适量步骤2）扩增出的产物用琼脂糖电泳分离，经染色剂Goldview染色后于凝胶成像系统检测，根据扩增产物的大小判定结果，如果能特异性扩增出750bp左右的条带，则进行测序分析。

本发明还提供一种黑线仓鼠的分子鉴定方法，其中扩增体系为：

本发明还提供一种黑线仓鼠的分子鉴定方法，其中扩增反应程序为：

预变性94℃5min，35个循环，其中变性94℃30s、退火55℃40s、延伸72℃60s，最后延伸72℃10min。

本发明还提供一种黑线仓鼠的分子鉴定方法，其中：

取5μL PCR扩增产物，用1%琼脂糖凝胶电泳，130V电压，电泳35min，染色剂Goldview染色，凝胶成像系统检测。

本发明还提供一种快速鉴定黑线仓鼠的方法，其特征在于：

采用传统的形态学鉴定与分子鉴定方法相结合。

本发明采用传统的形态学鉴定与分子分类方法相结合，对所述黑线仓鼠进行鉴定，可确保物种鉴定的准确性和可靠性。

附图说明

图1为本发明的黑线仓鼠COI基因PCR扩增结果电泳鉴定图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

1、标本的采集与保存

采用鼠夹法进行标本采集，采获的标本经酒精消毒后直接解剖，取其肝脏保存于75%酒精中带回。

2、DNA模板制备

采用TIANGEN DP304-03试剂盒提取黑线仓鼠DNA，提取的DNA样品于-80℃保存备用。

3、引物合成

本实施例所用引物如下：