[发明专利]一种分泌表达人Ⅲ型胶原α链蛋白的毕赤酵母工程菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种分泌表达人Ⅲ型胶原α链蛋白的毕赤酵母工程菌，其特征在于：

所述的工程菌于2013年8月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.7982。

2.根据权利要求1所述的一种分泌表达人Ⅲ型胶原α链蛋白的毕赤酵母工程菌，其特征在于：

所述的工程菌是将从人胎盘组织中克隆出的人Ⅲ型胶原α链基因CO3A1与表达载体pPIC9K连接后，导入毕赤酵母SMD1168，构建而成的转基因工程菌。

3.一种分泌表达人Ⅲ型胶原α链蛋白的毕赤酵母工程菌的构建方法，其特征在于：

由以下步骤实现：

步骤一：从人胎盘组织中提取总RNA，反转录建立cDNA文库，PCR方法扩增人Ⅲ型胶原α链基因CO3A1；

步骤二：将人Ⅲ型胶原α链基因CO3A1连入毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K中构建表达质粒pPIC9K-CO3A1；

步骤三：将构建好的质粒pPIC9K-CO3A1酶切线性化后，导入毕赤酵母SMD1168中；

步骤四：测定人Ⅲ型胶原α链基因CO3A1转化进入了毕赤酵母SMD1168中，获得转CO3A1基因的毕赤酵母工程菌株。

4.根据权利要求3所述的一种分泌表达人Ⅲ型胶原α链蛋白的毕赤酵母工程菌的构建方法，其特征在于：

所述的人Ⅲ型胶原α链基因CO3A1的序列为SEQ ID No.1。

5.根据权利要求1所述的一种分泌表达人Ⅲ型胶原α链蛋白的毕赤酵母工程菌在人Ⅲ型胶原α链蛋白高效表达中的应用。

6.根据权利要求5所述的一种分泌表达人Ⅲ型胶原α链蛋白的毕赤酵母工程菌在人Ⅲ型胶原α链蛋白高效表达中的应用，其特征在于：

所表达的人Ⅲ型胶原α链蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID No.2。