[发明专利]茶叶中草甘膦和草铵膦农药残留量的柱前衍生-UPLC-ESI+-MS/MS检测方法

说明书

技术领域

本发明属于食品检测领域，具体涉及茶叶（茶叶基质或类似茶叶基质）中草甘膦和草铵膦农药（除草剂）残留量的柱前衍生-UPLC-ESI⁺-MS/MS检测方法。 

背景技术

草甘膦和草铵膦是两种广谱触杀性除草剂，被广泛应用于农业、林业及园艺的栽培中。因草甘膦、草铵膦除草剂使用量的日益增大和不合理，使其常被发现存在于环境水样、土壤及植物中，这样长期积累会引起环境污染，并会对人类健康造成严重威胁。随着GB2763-2012（食品安全国家标准食品中农药最大残留限量）的发布实施，草甘膦、草铵膦被新增为茶叶农药残留的强检项目。 

草甘膦和草铵膦结构类似，且均含有膦酸基、羟基、氨基，是极强的两性化合物，难挥发。目前，草甘膦和草铵膦的检测方法有①液相色谱法，②柱前衍生后气相色谱法、气相色谱-质谱法及液相色谱-质谱/质谱法。 

基于茶叶基质的复杂性，以上方法用于茶叶中草甘膦、草铵膦农药（除草剂）残留量的测定存在以下缺陷： 

①液相色谱法：草甘膦和草铵膦的分子结构中没有共轭双键，仅存在n-π共轭，紫外区基本无吸收，直接测定灵敏度差，不能满足农药残留量的分析测试要求。在进行茶叶中草甘膦和草铵膦农药（除草剂）残留提取后，提取液往往会引入茶多酚、咖啡碱、果胶、糖类等杂质，然而现有净化方式又很难将这些杂质完全去除，最终未除尽的杂质会对检测造成干扰，导致测量结果不准确。 

②柱前衍生法：柱前衍生法的原理为：在一定条件下，将草甘膦、草铵膦目标物与衍生试剂反应，生成检测器能够探测、响应度高、灵敏度好的待测物质。采用气相色谱法、气相色谱-质谱法主要是因为草甘膦、草铵膦目标物通过柱前衍生后，生成易挥发、易溶于有机溶剂等的待测物，该检测方法虽然具有较高的灵敏度，但将草甘膦和草铵膦目标物转化为易气化物质的过程中，引入的试剂较多，操作过程相对繁琐，检测效率极低。采用液相色谱-质谱/质谱法，在离子源ESI方面，标准SN/T1923-2007（进出口食品中草甘膦残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法）采用ESI源的正离子模式，而文献(液相色谱-串联质谱法测定稻米中的草甘膦和氨甲基膦酸残留，曹赵云、牟仁祥、陈铭学，色谱，2010年第28卷第8期，743-748)研究结果为负离子模式下峰型、响应重复性更好，因文献研究结果的不统一，给后续方法的摸索造成了 一定困扰；在茶叶中草甘膦、草铵膦等提取与净化方面，现有资料需要用不同浓度的氢氧化钾、盐酸等溶液进行pH的精密调节，操作过程十分复杂，且采用离子交换小柱净化分析得出的加标回收率低、不稳定（SN/T1923-2007进出口食品中草甘膦残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法）。 

此外，上述方法均只涉及单一农药残留物质的分析，至今还未出现能够同时检测茶叶中草甘膦和草铵膦（特别是草铵膦）含量的方法，相关机构或国家单位也未发布过检测标准，未检索到相关的研究文献。 

发明内容

为解决现有茶叶中草甘膦和草铵膦农药（除草剂）残留量测定中的问题，本发明的目的是提供一种样品前处理简单快速，并可同时测定茶叶（茶叶基质或类似茶叶基质）中草甘膦和草铵膦（除草剂）残留量的高效、准确、重复性好、灵敏度高的柱前衍生-UPLC-ESI⁺-MS/MS检测方法。 

本发明茶叶中草甘膦和草铵膦农药残留量的柱前衍生-UPLC-ESI⁺-MS/MS检测方法，茶叶按GB/T8303制得茶样包括以下步骤： 

a)茶样用超纯水和二氯甲烷超声提取或回旋振荡，取上清液； 

b)上清液经C₁₈反相硅胶键合固相萃取柱（C₁₈小柱）净化得到净化液； 

c)用FMOC-Cl丙酮衍生液、硼酸钠缓冲盐溶液衍生净化液制得衍生样品（待测液）； 

d)将待测液进行UPLC-ESI⁺-MS/MS扫描，扫描结果用草甘膦、草铵膦各自标准校正曲线进行校正，分别得出待测液中草甘膦、草铵膦残留量的质量体积浓度c(μg/mL)； 

e)用下述算式分别计算出茶叶中草甘膦、草铵膦残留量：