[发明专利]一种用于检测犬细小病毒的胶体金试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种用于检测犬细小病毒的胶体金试纸条及其应用。

背景技术

胶体金免疫层析技术(Gold Immunochromatographic assay,GICA)是一种基于抗原和抗体特异性反应的标记诊断技术，1971年Faulk把胶体金引入免疫化学，从而诞生了免疫胶体金技术。20世纪80年代又兴起了以NC膜为固相载体的免疫胶体金检测技术，该技术是在McAb、ELISA等技术基础上发展起来的一种快速而简单的新型诊断技术。刘煜凯等1995年将免疫层析法作早孕快速诊断测定，随后出现了人早孕试纸条的广泛应用。郝桂兰等利用免疫胶体金试验，采取病死鸽棉拭子样品30min内即完成对一发病鸽群的快速鉴别诊断。王长美等用免疫胶体金试验诊断出患禽Ⅰ型副黏病毒病的鹅群。徐葛林等制备了适于野外对动物脑或唾液中的狂犬病病毒抗原检测的诊断试纸条。郑鸣等运用双抗原夹心法于国内首先建立了猪瘟病毒抗体检测免疫层析试纸条。刘春龙等建立了检测牛初乳中免疫球蛋白(IgG)含量的免疫胶体金法。李恪梅等用布鲁菌纯蛋白衍化物作为该检测板的包被抗原，建立了用间接法检测人和不同动物血液样品中的抗布鲁菌抗体的新方法。

胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4）的水溶胶，氯金酸在还原剂的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。胶体金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团借静电吸引而形成牢固结合。

GICA的原理是以胶体金作为示踪标记物，以微孔膜为固相载体，包被已知抗原或抗体，加入待测样后，经微孔膜的渗滤作用或毛细管虹吸作用使样本中的抗体或抗原与膜上包被的抗原或抗体结合，再通过胶体金标记物与之反应形成红色的可见结果。最常用的是双抗夹心法检测抗原。

测定时将试纸条下端浸入液体标本中，下端吸水材料即吸取液体向上端移动，流经C处时使干片上的胶体金复合物复溶，并带动其向膜条渗移。标本中待测特异抗原，可与胶体金复合物中的抗体结合，此抗原抗体复合物流至测试区即被固相抗体捕获，在膜上显出红色反应线条（T）。过剩的胶体金复合物继续前行，至参照区与固相抗小鼠IgG结合（胶体金复合物中的单克隆抗体为小鼠IgG），而显出红色质控线条（R）。阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条

目前，最常应用的检测犬细小病毒（CPV）的方法是血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)及ELISA方法。其中HA试验最为经济，但是也存在缺点，一方面获取造价昂贵新鲜的红细胞比较困难，另一方面，该方法只适用于CPV感染后期样本检测，不适应近年来早期、快速检测的要求。ELISA方法则应用较多，但操作要求较高，并且还需要酶标仪判定结果，因此不适于基层使用。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种适用于CPV感染早期的检测试剂条，利用该试剂条检测犬细小病毒，方法简单、检测时间短、成本低。

为了实现本发明目的，本发明首先提供一种用于检测犬细小病毒的胶体金试纸条，所述胶体金试剂条包含：

1）包被犬细小病毒抗原的多克隆抗体和二抗IgG两个条带的硝酸纤维膜；

2）含有胶体金标记犬细小病毒抗原的单克隆抗体的玻璃纤维膜。

其中，所述的二抗IgG为羊抗鼠IgG抗体。

进一步地，所述硝酸纤维膜中犬细小病毒抗原的多克隆抗体的浓度为1mg/mL，所述羊抗鼠IgG抗体的浓度为1mg/mL。

作为优选，所述玻璃纤维膜中胶体金标记的犬细小病毒抗原的单克隆抗体的标记pH值为8.5，单克隆抗体与胶体金结合浓度为40μg/mL。

作为优选，所述胶体金颗粒平均直径为25nm。

进一步地，所述胶体金试纸条能检出犬细小病毒最低HA效价为1:80。

前述胶体金试纸条，还包括底板、样品垫和吸水纸，所述底板上黏贴硝酸纤维膜，硝酸纤维膜上方粘贴吸水纸，硝酸纤维膜下方依次相互搭接粘贴玻璃纤维膜和样品垫。

本发明还提供了一种制备前述胶体金试纸条的方法，包括如下步骤：

1）制备犬细小病毒抗原的多克隆抗体；

2）硝酸纤维膜的制备：将犬细小病毒抗原的多克隆抗体稀释成1mg/mL，将羊抗鼠IgG抗体稀释成1mg/mL；将硝酸纤维膜贴于底板后，用三维划膜仪在硝酸纤维膜上划上上述犬细小病毒抗原的多克隆抗体与羊抗鼠IgG抗体，分别形成检测线和质控线，室温包被过夜，备用；