[发明专利]NFYAP1基因及其表达产物的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因的应用，特别是涉及一种NFYAP1基因及其表达产物的应用。

背景技术

肝癌严重威胁着我国人民的生命健康。肝癌的诊断，尤其早期诊断是临床诊疗和预后的关键。目前，在我国肝癌的定性诊断仍以检测血清AFP（甲胎蛋白）为主，呈现如下特点：60%以上的肝癌病例血清AFP＞400μg/L；目前还没有其他肿瘤标志物的特异性可与AFP相媲美；AFP检测较少依赖影像学设备和新技术。AFP是目前全球应用最为广泛的肝癌肿瘤标志物，已经应用了数十年，其敏感性为40%～65%，特异性为76%～96%，如此的敏感性和特异性均不令人满意。因此，发现灵敏度和特异性高的新的肿瘤标志物将是提高肝癌早期诊断水平的关键。除AFP外，近年来用于肝癌检测的其他血清标志物还包括：甲胎蛋白异质体、γ-谷氨酰转肽酶同工酶Ⅱ（GGT-Ⅱ）、碱性磷酸酶同工酶I、醛缩酶同工酶A（ALD-A）、岩藻糖苷酶（AFU）、抗胰蛋白酶I、异常凝血酶原、铁蛋白与酸性铁蛋白等。AFP异质体和异常凝血酶原的应用提高了肝癌患者的检出率，但早期诊断和指导个性化治疗的分子分型诊断仍是我们面临的极大挑战。一般认为以下四类生物分子常作为原发性肝癌标志物：①癌胚和糖蛋白抗原；②酶和同工酶；③细胞因子；④基因。

然而，关于人NFYAP1基因在肿瘤的表达谱及与肿瘤发生的关系尚不清楚，有待进一步研究。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种NFYAP1基因及其表达产物的应用，使肝癌诊断更加准确、快速。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种NFYAP1基因及其表达产物在制备诊断肝癌的产品中的应用。

所述诊断肝癌的产品包括：用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或基因芯片诊断肝癌的产品。

在本发明中，所述用RT-PCR诊断肝癌的产品至少包括一对特异扩增NFYAP1基因的引物。

所述用实时定量PCR诊断肝癌的产品至少包括一对特异扩增NFYAP1基因的引物。其中，用于制备用RT-PCR或实时定量PCR诊断肝癌产品中的一对特异扩增NFYAP1基因的引物，所述引物的上游引物序列具有如SEQ ID NO.1所示的序列或其互补序列，所述引物对的下游引物序列具有如SEQ ID NO.2所示的序列或其互补序列。

所述用免疫检测诊断肝癌的产品包括：与NFYAP1蛋白特异性结合的抗体，包括多克隆抗体和单克隆抗体。

所述用原位杂交诊断肝癌的产品包括：与NFYAP1基因的核酸序列杂交的探针。

所述用基因芯片诊断肝癌的产品包括：与NFYAP1基因的核酸序列杂交的探针。

在本发明中，可以使用一系列本领域已知的方法来制备针对NFYAP1蛋白特异的抗体。例如，将提纯的人NFYAP1基因产物或它的抗原片段注射入动物体内以产生多克隆抗体。同样，表达人NFYAP1蛋白或它的抗原的细胞也可以用来对动物致免疫而产生抗体。根据本发明制备的抗体可以是单克隆抗体，这些单克隆抗体可用杂交瘤及时制备。本发明的抗体包括可以阻抑NFYAP1功能的抗体，也可以是不影响人NFYAP1功能的抗体。每一类抗体都可以通过对人NFYAP1基因产物的片段或功能域致免疫而产生，而人NFYAP1基因产物及其片段可以用重组方法产生或用多肽合成仪进行合成。与非修饰形式的NFYAP1基因产物结合的抗体，可以利用在原核细胞例如E.coli中产生的基因产物来免疫动物而得到。与翻译后修饰形式如糖基化或磷酸化NFYAP1蛋白或多肽结合的抗体，可以利用在真核细胞如酵母或昆虫细胞中产生的基因产物来免疫动物而得到。

在本发明中，所述探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其他衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15～25个碱基对最佳。所述探针自身互补最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。

本发明实验证实NFYAP1基因在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织，因此，NFYAP1基因及其表达产物（蛋白产物）可作为诊断肝癌的特异性标志基因，使肝癌诊断更加准确、快速。

附图说明

下面结合附图与具体实施方式对本发明作进一步详细的说明：