[发明专利]一种柱前衍生化法测定苦碟子注射液中6种氨基酸含量的方法

说明书

技术领域　

本发明涉及一种柱前衍生化法测定苦碟子注射液中6种氨基酸含量的方法。属于中药成分分析领域。 

背景技术

在现有技术中，苦碟子别名满天星，苦荬菜，主要分布于我国东北及内蒙古等地，为菊科植物抱茎苦荬菜(Ixeris sonchifolia(Bge.)Hance)的当年生干燥全草，性寒，味苦、辛，具有清热解毒、排脓止痛之功效。苦碟子(碟脉灵)注射液是以苦碟子为原料提取精制而成的静脉注射液, 具有活血化瘀，改善微循环的作用^[2]。该注射液已上市多年，疗效确切。苦碟子注射液（曾用名：碟脉灵注射液）列入国家药品标准产品（国药准字Z20025450），由通化华夏药业有限责任公司生产。 

处方：抱茎苦荬菜1000g，制成1000ml。 

制法：取抱茎苦荬菜，加水煎煮二次，第一次1小时，第二次0.5小时，合并煎液，浓缩至每1ml相当于原生药0.5g，放冷至40℃以下，在搅拌下加10%氧化钙乳调节pH值至10，放置12小时，离心，离心沉淀物称重，悬浮于5.3倍量95%乙醇中（使含醇量达80%），加50%硫酸溶液调节pH值至3－4，充分搅拌使反应完全，离心，离心液加40%氢氧化钠溶液中和pH值至7.0，滤过，滤液回收乙醇，并挥尽乙醇，用注射用水稀释至每1ml相当于原生药4g，置-5℃以下放置12小时以上，滤过，滤液加0.1－0.2%药用活性炭粉末，煮沸15分钟，置-5℃以下放置24小时以上，滤过，滤液加注射用水稀释至规定量，调节pH值至7.0－7.5，滤过，灌封，灭菌即得。性状：本品为浅黄棕色至黄棕色的澄明液体。 

含量测定：本品每10ml含总黄酮以无水芦丁（C₂₇H₃₀O₁₆）计，不得少于4.0mg。含抱茎苦荬菜以腺苷（C₁₀H₁₂N₅O₄）计，不得少于0.025mg。 

功能主治：活血止痛，清热祛瘀。用于瘀血闭阻的胸痹，证见：胸闷、心痛，口苦，舌暗红或存瘀斑等。适用于冠心病、心绞痛见上述病状者。亦可用于脑梗塞者。 

用法用量：静脉滴注，一次10－40ml，一日1次；用5%葡萄糖或0.9%氯化钠注射液稀释至250－500ml后应用；14天为一疗程；或遵医嘱。 

规格：每支装（1）10ml，（2）20ml，（3）40ml。 

药理研究表明，苦碟子注射液具有扩张冠状血管，改善心肌血氧供应，增加纤维蛋白溶血酶活性，抑制血栓形成的功能，临床应用中在脑梗塞，冠心病和心绞痛的治疗方面有重要的药用价值。中药注射剂是安全风险较高的品种，相关标准的要求较高，苦碟子注射液目前在质量控制方面的研究主要集中于黄酮类、糖类和有机酸类的含量测定，然而氨基酸类成分在苦碟子注射液中含量较大且有明确药效。目前中药中氨基酸含量测定方法主要为氨基酸自动分析仪分析法、高效液相色谱法（衍生高效液相色谱法、未衍生高效液相色谱法、毛细管电泳法等。其中氨基酸自动分析仪分析法仪器价格昂贵，毛细管电泳法方法复杂，因此本文建立了同时测定6种氨基酸的柱前衍生化方法并对苦碟子注射液中的氨基酸进行了含量测定，为全面评价其质量提供依据。 

发明内容

本发明的目的是针对上述不足而提供一种采用柱前衍生化法测定苦碟子注射液中6种氨基酸含量的方法，方法简便、准确，可靠，同时为其质量控制提供方法学参考依据。 

本发明的技术解决方案是：一种柱前衍生化法测定苦碟子注射液中6种氨基酸含量的方法，其步骤如下： 

（1）混合对照品溶液的配制：

精密称取脯氨酸标准品4.34 mg，丙氨酸标准品3.74 mg，缬氨酸标准品4.44 mg，异亮氨酸标准品3.98 mg，亮氨酸标准品4.32 mg，苯丙氨酸标准品4.22 mg，分别置10 mL量瓶中，先加少量80%乙醇溶解再定容至刻度，摇匀，即得对照品储备液；分别精密吸取对照品储备液适量，制成含脯氨酸217.0 mg·L^-1，丙氨酸37.40 mg·L^-1，缬氨酸44.40 mg·L^-1，异亮氨酸39.80 mg·L^-1，亮氨酸43.20 mg·L^-1，苯丙氨酸42.20 mg·L^-1的混合对照品溶液。

（2）供试品溶液的配制：