[发明专利]一种红毛五加多糖的超声波提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药制药领域，特别是指一种红毛五加多糖的超声波提取方法。

背景技术

红毛五加(Acanthopanax giraldii Harms)为五加科五加属植物，其茎皮入药，性温，味辛，入肝肾经，具有祛风湿，通关节、强筋骨功效，主治痿痹、拘挛疼痛、风寒湿痹、足膝无力、皮肤风湿及阴痿囊湿等。近年来药理学研究表明多糖是其主要药物活性成分之一。吕晓英等(实用癌症杂志.2000.16(1)：6-8)研究发现，红毛五加多糖能够抑制胃癌细胞集落形成、诱导人胃癌细胞凋亡。张莅峡等(中药材.1994.17(5)：36-38)研究表明，红毛五加多糖参与机体的体液免疫，可激发T、B淋巴细胞的生物学功能，对小鼠T、B淋巴细胞增殖反应有增强效应。Wang J.Z.等(Cancer Let t.1992.65(1)：79-84)研究表明红毛五加多糖促进辐射损伤小鼠骨髓造血功能的恢复，提高抗体的抗辐射能力。另外，还有研究表明红毛五加多糖具有抗病毒、保肝等药理作用。

虽然红毛五加多糖药理作用研究取得较大进展，但是关于红毛五加多糖提取工艺的研究较少，大多停留于传统的沸水浸提法。专利“红毛五加复合多糖、制备工艺、用途及该复合多糖组合物”和文章《红毛五加多糖分离精制实验研究》、《红毛五加多糖含量测定及急性毒性实验研究》公开了各自提取红毛五加多糖的方法，均为高温沸水浸提法，提取效率相对较低，其中《红毛五加多糖分离精制实验研究》中的提取效率为0.39％；《红毛五加多糖含量测定及急性毒性实验研究》中提到在累计提取时间达到3.5h后提取率仅为为2.5％。因而寻找一简便、快速、高效且不破坏其生理活性成分的提取方法是首要解决的问题之一。

发明内容

本发明提出一种红毛五加多糖的超声波提取方法，该方法能够高效、快捷的提取红毛五加多糖，且保持其生物活性，并最大限度的提高红毛五加多糖的提取率。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种红毛五加多糖的超声波提取方法，依次包括如下步骤：

(1)粉碎：红毛五加70～80℃烘干，粉碎机粉碎；

(2)提取：按照红毛五加与水重量比为1：20～22加水浸泡，并以超声波法提取红毛五加多糖，过滤后得提取液；

(3)去除蛋白：将提取液减压浓缩至原体积1/10～1/12，加入三氯醋酸充分溶解后静置10～12h，过滤收集滤液；

(4)醇沉：滤液中加入乙醇充分搅拌、静置，收集沉淀；

(5)冷冻干燥：用水复溶后冷冻干燥，既得红毛五加多糖。

上述技术方案中，步骤(1)中，粉碎机粉碎具体为：将红毛五加粉碎至130～150目。

上述技术方案中，步骤(2)中，以超声波法提取具体为：药材加水浸泡3～5h，超声波频率为30～50KHz，功率为400～600W，提取温度为65～75℃，提取时间为40～50min；并且其优选为：药材浸泡3h～5h，超声波频率为40KHz，功率为400W，提取时间为40～50min，提取温度为65～75℃。

上述技术方案中，步骤(3)中减压浓缩具体为：压力为-0.09～-0.11MPa，浓缩温度为60～70℃，浓缩至原体积1/10～1/12。

上述技术方案中，步骤(3)中加入三氯醋酸具体为：加入三氯醋酸至终浓度为5～6mg/mL。

上述技术方案中，步骤(4)醇沉步骤具体为：将提取液中糖浓度加水稀释调整为4～6mg/mL，加入糖溶液3～4倍体积的无水乙醇，0～4℃静置12～24h，离心收集沉淀。

试验中发现，当糖浓度为4～6mg/mL时，多糖的沉淀效果最好，及得率最高。

上述技术方案中，步骤(5)冷冻干燥：用水复溶后冷冻干燥的温度为-25～-15℃，并且优选为-20℃，即得红毛五加活性多糖。

本发明方法的原理是：通过将红毛五加粉碎至130～150目，增加了红毛五加的比表面积，提高了多糖的溶出率；然后，利用超声波的空化作用加速多糖的溶出，另外超声波的次级效应如机械振动、乳化、扩散、化学效应等也能加速多糖的扩散释放并充分与溶剂混合，有利于提取。

以下为表明红毛五加多糖对小鼠免疫功能的影响的实验数据

1实验材料：

昆明种小鼠，购自山东中医药大学实验动物中心。红毛五加多糖由本发明的技术方案制备；香菇多糖、环磷酰胺购自潍坊金通大药房。

2实验方法