[发明专利]淀粉胚乳特异非表达启动子NSE及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种淀粉胚乳特异非表达启动子NSE及其应用。

背景技术

在植物基因工程中，对以种子，果实为主要收获产物的植物，利用种子无表达启动子驱动目的基因仅在茎，叶等绿色组织中表达，而在种子食用部分无表达，是提高转基因食品安全性的有效策略。

目前与植物种子不表达相关国内外专利举例如下：（1）申请号:201210202831.8：一种柑橘的绿色组织特异启动子；（2）申请号:200710051443.3：组织特异性表达启动子PD540及其在水稻改良中的应用；（3）申请号:01823070.9：营养生长特异性启动子及由此而得的基因重组植物；（4）申请号:96104811.5，一种豆荚内特异表达毒蛋白的转基因植物；（5）WO0077223:―PROMOTER ENABLING TRANSGENE EXPRESSION IN THE WHOLE PLANT EXCEPT IN THE SEED.(6)US2004117876:―Vegetative growth-specific promoter and genetically modified plants obtained thereby.(7)

CN102417906:―rice green tissue-specific promoter PD54O-544,not expressed in embryos and endosperms.(8)WO2008081478:―Chimeric promoter constructed by fusion of GhrbcSP and D35SP promoters(expressed in all tissues except seed endosperm)。这些专利为转基因植物的应用提供了有利启动子工具，但是由于不同专利涉及不同的启动子，其表达谱（即具体的表达部位和表达水平）存在明显差异；而且同一个启动子应用在不同的单，双子叶植物，甚至不同物种间时经常有不同的表达效果。因此现有的启动子资源难以满足植物基因工程的实际需求。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种DNA片段。

本发明提供的DNA片段，为如下1）或2）或3）的DNA分子：

1）序列表中序列1所示的DNA分子；

2）在严格条件下与1）限定的DNA序列杂交且具有启动子功能的DNA分子；

3）与1）限定的DNA序列具有90%以上同源性，且具有启动子功能的DNA分子。

上述严格条件可为在0.1×SSPE（或0.1×SSC）、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。

含有上述DNA片段的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌也是本发明保护的范围。

上述重组载体为将上述DNA片段替换掉表达载体pCAMBIA-1300-SGN中的CaMV35S启动子，得到的重组载体。

所述重组载体具体为将上述DNA片段取代pCAMBIA-1300-SGN的PstI和BamHI酶切识别位点间的小片段（CaMV35S启动子）得到的重组质粒。

扩增上述DNA片段的全长或其任意片段的引物对也是本发明保护的范围。

上述引物对由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单链DNA分子组成。

上述DNA片段在植物中启动目的基因表达中的应用也是本发明保护的范围。

上述应用中，所述目的基因表达为组织特异表达。

上述应用中，所述组织为除种子淀粉胚乳以外的其他植物组织。

上述应用中，所述除种子淀粉胚乳以外的其他植物组织为1）或2）：1）种子的胚、糊粉层或种皮；2）植物的根、叶鞘、茎、茎节、叶或穗。

上述应用中，所述植物为单子叶植物或双子叶植物；所述单子叶植物具体为水稻；

所述目的基因为GUS基因。

单子叶植物水稻种子的结构包括种皮、胚和胚乳，其中胚乳又分为糊粉层（aleurone layer）和淀粉胚乳（starchy endosperm）。在水稻加工成大米的过程中，种皮和果皮、胚以及胚乳的糊粉层都被破坏，而淀粉胚乳留下食用。