[发明专利]一种前列腺肿瘤标志物免疫传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种前列腺肿瘤标志物免疫传感器的制备方法及应用，属于新型纳米功能材料和生物传感技术领域。 

背景技术

肿瘤（tumor）是人体组织细胞由于内在和外界致病因素长时间的作用，导致细胞的遗传物质—脱氧核糖核酸（DNA）产生突变，使细胞的生长和分裂失去控制，从而发生异常增生和功能失调。肿瘤严重威胁人民健康，是近年来医学领域中备受重视的重大研究课题。 

肿瘤标志物（tumor marker）是指肿瘤组织及细胞所产生的活性物质的异常表达，肿瘤标志物在正常组织或良性疾病不产生或产量甚微，而肿瘤病人的组织、体液及排泄物中则有大量分泌，测得值异常升高。肿瘤标志物在肿瘤普查、诊断、治疗、病情监测、判断愈后、评价疗效和高危人群随访观察等方面都具有很大的实用价值。 

前列腺癌列男性恶性肿瘤发病率的第6位，2102年我国肿瘤登记地区前列腺癌发病率为9.92/10万，严重影响了广大男性的健康，引起了社会各界和医学领域的广泛关注。 

前列腺特异抗原(PSA)是由前列腺腺泡和导管的上皮细胞分泌的一种单链糖蛋白，在功能上属于类激肽释放酶的一种丝氨酸蛋白酶，是临床常规用于前列腺良性与恶性疾病诊断与鉴别诊断及前列腺癌患者术后随访的重要指标，对临床及病情监测有重要参考价值。 

肿瘤标志物的检测方法有许多。其中，具有推广应用价值或已被广泛应用的主要有：放射免疫分析法（RIA）、酶标记免疫分析技术（EIA）、免疫放射分析法（IRMA）、免疫化学发光分析（CLIA）、时间分辨荧光免疫分析技术（TrFLA）、液体芯片检测技术和SELDI-TOF-MS等。但这些技术一般需要复杂的监测仪器，检测时间长，普及性差，且有些试剂具有放射性，对人体有一定的危害。 

发明内容

本发明的目的是提供一种能克服上述缺陷、高灵敏的、特异性好和相对简单的一种前列腺肿瘤标志物免疫传感器的制备方法及应用。其技术方案为： 

一种前列腺肿瘤标志物免疫传感器的制备方法，其特征在于包括以下步骤： 

（1）二抗标记物Ag@NH₂-MCM-48/Ab₂的制备，取0.5～1.5mg银杂化的NH₂-MCM-48介孔材料溶于1mL、pH=7.4的磷酸盐缓冲溶液中，超声1～3h使其分散均匀，再加入1～3mL、10～20μg/mL的前列腺特异抗原二抗，4°C震荡12～24h，离心后除去上清液，得到二抗标记物Ag@NH₂-MCM-48/Ab₂； 

（2）免疫传感器的制备，以玻碳电极为工作电极，先用氨基化石墨烯—二茂铁甲醛复合材料水溶液修饰玻碳电极表面，后修饰上戊二醛，再用前列腺特异抗原一抗溶液进行修饰，再滴涂牛血清白蛋白溶液后，继续修饰前列腺特异抗原，最后修饰Ag@NH₂-MCM-48/Ab₂后，即得前列腺肿瘤标志物免疫传感器。 

所述的一种前列腺肿瘤标志物免疫传感器的制备方法，步骤（2）中氨基化石墨烯—二茂铁甲醛复合材料的制备步骤如下： 

1）室温下，将100～150mg氧化石墨烯分散在40～60mL乙二醇中，超声分散均匀，搅拌下滴加浓氨水1.0～1.5mL，得到黑棕色溶液，转移到聚四氟乙烯高压釜，150～180°C反应6～10h，冷却后离心，去掉上清液，用超纯水洗涤3次后，再在65°C干燥箱内干燥，得到氨基化石墨烯； 

2）将0.8～1.2mg氨基化石墨烯和1.0～1.5mg二茂铁甲醛分散于1mL、质量分数为0.5%～1.0%的羧甲基壳聚糖溶液中，震荡12h～24h，即得氨基化石墨烯—二茂铁甲醛复合材料。 

所述的一种前列腺肿瘤标志物免疫传感器的制备方法，步骤（1）中银杂化的NH₂-MCM-48介孔材料的制备步骤如下： 

1）将1.0～1.5g正硅酸四乙酯加入锥形瓶中，加超纯水62～95mL搅拌10min后，加入氢氧化钾0.5～1.0g，再一次性加入十六烷三甲基溴化铵0.65～1.5g，搅拌30～40min后转入高压釜，120°C水热晶化62～72h，所得白色粉末依次用超纯水和乙醇分别彻底清洗后，室温干燥，然后在马弗炉中以1°C/min的速度程序升温至550°C，保温6～8h，即得到MCM-48；