[发明专利]一种可用于快速鉴定微生物全基因组基因功能的方法

权利要求书

1.一种可用于快速鉴定微生物全基因组基因功能的方法，包括如下步骤：

（1）混合DNA的制备步骤

用病原微生物菌株作为载体，利用Tn转座子可以随机插入微生物基因组的特性，培养一批不同插入密度的细菌突变体菌体，在达到一定生长曲线后，将所有突变菌株DNA释放出来，这时，释放的DNA为各种不同突变菌株的混合DNA；

（2）特异引物的合成步骤

将步骤（1）得到的混合DNA进行片段化处理，所述片段化处理是取长度在300-800bp的末端突出的DNA片段；然后将所有片段化DNA连接一DNA粘端接头，该DNA粘端接头的5’端为Y型分叉，其序列式分别为：

5-ACACTCTATCGCTACACGACGCTCTTCCCTAC*T-3；

5-GTAGGGAAGAGCTCGTATGCCCTCTTCTGATTG-3；

在DNA片段两端分别连接上不同的DNA粘端接头后，合成特异引物，该特异引物含有与DNA粘端接头退火的5‘端，又含有Tn转座子插入基因组DNA的最旁界的序列的3’端，其序列式为：

5-ACACTCTATCGCTACACGACGCTCTTCCCTACTGTTACCAGGTCACAACCAAT-3

（3）特异引物扩增步骤

用步骤（2）制备的特异引物与DNA粘端接头的3‘端引物序列进行PCR扩增，富集出来的DNA片段是含有转座子插入基因组的边界序列和基因组DNA序列；

（4）测序引物插入步骤

将测序引物位于Tn插入基因组边界的13个bp，这样测序得到的序列是转座子边界13bp序列和插入基因组DNA的所有序列信息；

（5）按照常规高通量测序的后续步骤进行测序。