[发明专利]一种具有高活菌数的益生菌微胶囊的制备方法

权利要求书

1.一种具有高活菌数的益生菌微胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:

 （1） 菌株的活化：将保存于-20℃左右条件下的双歧杆菌甘油管保存的种子和保存于4℃左右条件下的枯草杆菌单菌落分别接种于种子培养基中，在32-45 ℃条件下，双歧杆菌厌氧静置培养24-36 h、枯草杆菌100-300 rpm振荡培养12-24 h，进行初次活化；

然后按1-5%的比例分别将初次活化的双歧杆菌和枯草杆菌培养液再次接入种子培养基中进行第二次活化4-12 h，活化条件与初次活化相同；按1：1左右的体积比混合双歧杆菌与枯草杆菌的培养液，得活化种子混合液；

（2）扩大培养：将活化种子混合液按1-10%（V/V）的比例接种于装有pH 6.5-8.5的2-20%天然有机体原料培养基的发酵罐中，天然有机体原料培养基的装液量为发酵罐容积50-80%，在35-45℃条件下静置培养24-48 h，收集菌液，其总活菌数≥2×10⁹ cfu/ml，得发酵液；

（3）洗涤：将发酵液于3000-8000 rpm下离心5-30 min，弃上清液，按体积比1：1-5将菌体沉淀用无菌水振荡混均，离心弃上清，反复洗涤1-3次，随后用1-5%乳清蛋白溶液重新悬浮菌体，其总活菌数≥1×10¹⁰ cfu/ml，得菌悬液；

（4）菌胶液制备：按比例将1-10%（W/V）海藻酸钠、0.5-1%（W/V）羧甲基壳聚糖、0.1-1 %（W/V）低聚糖、1-5 %（W/V）胡萝卜、0.5-2%（V/V）甘油和0.1-1%（V/V）吐温80加入到菌悬液中，搅拌混匀，厌氧室脱氧30-120 min，得菌胶液；

（5）微胶囊制备：用注射泵将菌胶液以10-30 ml/min流速注入1-10 ℃冷却的1-10%（M/V）的氯化钙溶液中，边滴加边以100-300 rpm的速度搅拌，固化30-60 min，无菌水洗涤三次，得湿微胶囊；

（6）干燥保藏：将湿微胶囊进行低温真空干燥后进行真空包装，得益生菌干微胶囊。

2.根据权利要求1所述的具有高活菌数的益生菌微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤（1）-步骤（5）均按无菌操作规程进行。

3.根据权利要求1所述的具有高活菌数的益生菌微胶囊的制备方法，其特征在于，对步骤（5）中所述湿微胶囊进行低温真空干燥为40 ^oC以下的任何一种干燥方式，并进行真空包装。

4.根据权利要求1所述的具有高活菌数的益生菌微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述的双歧杆菌菌株指的是野生型双歧杆菌、基因工程双歧杆菌中的一种或几种，所述的枯草杆菌菌株指的是野生型枯草杆菌、基因工程枯草杆菌中的一种或几种；所述种子培养基为改进性PYTG培养基。

5.根据权利要求1所述的具有高活菌数的益生菌微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述的厌氧方法为N₂和N₂、CO₂、H₂混合气进行脱氧的任一种。

6.根据权利要求1所述的具有高活菌数的益生菌微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述天然有机体原料为全脂牛奶、羊奶、马奶、大豆水解液、花生水解液和酵母水解液中的任一种。

7.根据权利要求1所述的具有高活菌数的益生菌微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述乳清蛋白为牛奶中的乳清蛋白。

8.根据权利要求1所述的具有高活菌数的益生菌微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤（4）所述低聚糖为人体不能利用而双歧杆菌易于吸收的低聚果糖和低聚果葡糖及其衍生物的任一种。