[发明专利]叶酸偶联壳聚糖-盐酸米托蒽醌纳米微粒的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及抗肿瘤靶向药物技术领域，具体涉及叶酸偶联壳聚糖-盐酸米托蒽醌纳米微粒的制备方法。

背景技术

抗肿瘤药物往往存在选择性不高的缺点，在杀伤肿瘤细胞的同时也可能杀死机体正常细胞，毒副作用较大，给患者带来极大的痛苦。叶酸受体是肿瘤选择性药物输送的特异性靶点，叶酸受体在约30%的肿瘤细胞（如卵巢癌细胞、结肠直肠癌细胞、肺癌细胞、肾癌细胞等）膜表面的活性和数量明显高于一般正常细胞。在药理学上，由于受体与其配体的结合具有特异性、选择性、亲合力强等特点，利用配体作为药物载体或与载体偶联，通过受体介导作用，可增加药物在病灶局部的浓度，从而能够提高药物的疗效，降低毒副作用，达到靶向治疗的目的。因此，作为叶酸受体的配体，叶酸在肿瘤治疗及预防中越来越显示出其应用价值。

壳聚糖是一种广泛存在于自然界的聚阳离子多糖衍生物，又称可溶性甲壳质、甲壳胺、几丁聚糖等，其结构类似于纤维素。经壳聚糖负载的抗癌药物的作用时间显著延长，并且壳聚糖本身就具有抗肿瘤的特性，壳聚糖作为抗癌药物的载体和抗癌药物共同使用后，能够明显地提高药物疗效并降低药物的毒副作用， 因此，壳聚糖是抗癌药物的理想载体。

现有技术中，将叶酸分子偶联到药物载体上的方法，多采用偶联剂将叶酸制备成叶酸活性酯，并且在制备叶酸活性酯时需使用大量的有机溶剂（例如二甲基亚砜）作为液相用以进行反应。反应完毕后，为了除去有机溶剂，需要经过长时间的透析步骤，才能彻底将有机溶剂去除。因此，现有技术将叶酸分子偶联到药物载体上的方法，一方面存在反应时间长和步骤繁琐的缺点，导致整个制备时间长，生产效率低；另一方面，所使用的偶联剂和作为液相的有机溶剂通常具有毒性，且偶联剂容易残留，残留的偶联试剂容易对机体造成细胞毒性以及对大分子产生灭活。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供叶酸偶联壳聚糖-盐酸米托蒽醌纳米微粒的制备方法，该制备方法简单且反应时间短。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

叶酸偶联壳聚糖-盐酸米托蒽醌纳米微粒的制备方法，它包括以下步骤：

步骤一，将盐酸米托蒽醌溶液与壳聚糖醋酸溶液混合，得到壳聚糖与盐酸米托蒽醌混合液；

步骤二，在一定温度下，将所述壳聚糖与盐酸米托蒽醌混合液加入到叶酸氨盐溶液中，然后继续往所述叶酸氨盐溶液中加入多聚磷酸钠水溶液，混合均匀，得到叶酸-壳聚糖-盐酸米托蒽醌微球水分散体系；

步骤三，将步骤二得到的叶酸-壳聚糖-盐酸米托蒽醌微球水分散体系进行离心得到沉淀物，将沉淀物洗涤后进行真空冷冻干燥，得到叶酸偶联壳聚糖-盐酸米托蒽醌纳米微粒。

上述技术方案中，所述盐酸米托蒽醌溶液、所述壳聚糖醋酸溶液、所述叶酸氨盐溶液和所述多聚磷酸钠水溶液的体积比为1mL~2mL：2mL~6mL：2mL~6mL：1mL~3mL。

上述技术方案中，步骤一中，所述盐酸米托蒽醌溶液是通过将盐酸米托蒽醌溶于水中配制而成，所述盐酸米托蒽醌溶液的质量/体积浓度为0.5mg/mL~3mg/mL。

上述技术方案中，步骤一中，所述壳聚糖醋酸溶液是通过将壳聚糖溶于醋酸溶液中配制而成，所述壳聚糖醋酸溶液的质量/体积浓度为1mg/mL~5mg/mL；所述醋酸溶液的质量百分浓度为1%~5%。

上述技术方案中，步骤二中，所述叶酸氨盐溶液是通过将叶酸粉末溶于氨水中配制而成，所述叶酸氨盐溶液的质量/体积浓度为0.2mg/mL~1mg/mL；所述氨水的质量百分浓度为35%~45%。

上述技术方案中，步骤二中，所述多聚磷酸钠水溶液是通过将多聚磷酸钠溶于水中配制而成，所述多聚磷酸钠水溶液的质量/体积浓度为1mg/mL~4mg/mL。

上述技术方案中，所述多聚磷酸钠为三聚磷酸钠、四聚磷酸钠或五聚磷酸钠中的任意一种。

上述技术方案中，步骤二中，在磁力搅拌和水浴加热的条件下，将所述壳聚糖与盐酸米托蒽醌混合液加入到叶酸氨盐溶液中，然后往所述叶酸氨盐溶液中继续加入多聚磷酸钠水溶液，加入完毕后，继续磁力搅拌10min~20min；

所述磁力搅拌的速度为900r/min~1000r/min；所述水浴加热的温度为50℃~60℃。

上述技术方案中，步骤二中，将所述壳聚糖与盐酸米托蒽醌混合液用注射器以逐滴滴入的方式加入到叶酸氨盐溶液中，然后往所述叶酸氨盐溶液中继续用注射器以逐滴滴入的方式加入多聚磷酸钠水溶液，所述逐滴滴入的速度均为1滴/秒~3滴/秒。