[发明专利]一种解淀粉芽孢杆菌和微生物菌剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种对花生叶斑病有拮抗作用的解淀粉芽孢杆菌BA-KA1菌株和能够防治花生叶斑病的微生物菌剂，属于生物技术领域。

背景技术

花生叶斑病是叶部黑斑病、褐斑病的总称，该病主要发生在叶片上，叶柄、托叶，茎也受其害，一般情况下先在下部叶片上开始发病，逐步向上部叶片蔓延，发病严重时在茎秆、叶柄、果针等部位均能形成病斑，叶片正面的叶斑周围有清晰地黄色晕轮，叶片黄褐色至暗褐色。

目前，农民对花生叶斑病的认识不足，认为花生生育后期的叶斑病基本不影响产量，所以很少防治。然而，花生叶斑病的发生会引起植株叶片坏死或落叶，从而导致花生生育后期光合作用不足，严重影响了花生的产量，发病严重时产量损失达30%以上，因此急需进行有效防治。一些化学杀菌剂如甲基托布津、多菌灵等具有一定的防治花生叶斑病的效果，但是这些农药长期使用，一方面会引起病原菌抗性，另一方面化学药剂的使用还会造成环境污染。

 利用拮抗微生物防治农作物病害由于具有低污染、低残留、不引起病害抗性等优点，该防治方式的关键是进行对病原微生物有拮抗作用、且抑菌谱广的拮抗微生物的筛选和制备制剂。目前在花生叶斑病生物防治方面的研究还很少，本发明的目的在于筛选出一种能够高效拮抗花生叶斑病病原菌的微生物菌株，并形成微生物菌剂，通过生物防治的方式降低花生叶斑病给花生生产带来的危害。

发明内容

本发明的目的在于克服目前利用化学农药防治花生叶斑病带来的环境危害，提供一种能够高效拮抗花生叶斑病的解淀粉芽孢杆菌菌株及微生物制剂，该制剂喷施于花生叶片上，可以有效防治花生叶斑病，从而减少花生生产中化学农药的使用，降低环境污染，提高花生的产量。

本发明的技术方案如下：

本发明的解淀粉芽孢杆菌菌株BA-KA1于2013年10月15日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心进行了保藏，保藏号为CGMCCNo.8341。

本发明所述的解淀粉芽孢杆菌BA-KA1拮抗花生叶斑病病菌。

本发明所述的解淀粉芽孢杆菌BA-KA1对群结腐霉、小麦赤霉病菌、灰霉病菌、丝核菌、烟草赤星病菌、辣椒炭疽病菌、辣椒疫霉病菌、棉花枯萎病或番茄早疫病菌具有拮抗作用。

本发明的微生物菌剂含有解淀粉芽孢杆菌菌株BA-KA1，其中所述的解淀粉芽孢杆菌BA-KA1于2013年10月15日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心进行了保藏，保藏号为CGMCCNo.8341。

本发明的微生物菌剂在防治花生叶斑病中的应用。

本发明所述微生物菌剂中的总活菌数不低于5×10⁹个/g。

本发明微生物菌剂的制备方法包括以下步骤：

步骤一：按体积比5.0% 的比例将培养好的种子液接种到大量发酵培养基中， 28℃，培养36h，得到发酵液；

步骤二：将步骤一的发酵液与基质等量混合均匀并干燥，得到微生物菌剂。

本发明的微生物菌剂的制备方法步骤一中所述的大量发酵培养基包含葡萄糖2.5%（m/V）、蛋白胨0.8%（m/V）、酵母膏0.58%（m/V）、磷酸二氢钾0.35%（m/V）和碳酸钙0.25%（m/V），pH值7.2 。

本发明的微生物菌剂的制备方法步骤一所述种子液通过下述方法获得：将保存的解淀粉芽孢杆菌菌株BA-KA1划线转接到PB平板中，置于培养箱28℃恒温培养2天；将获得的解淀粉芽孢杆菌菌株BA-KA1 的菌苔接种到PB 液体培养基中，28℃摇床振荡培养18h 得到种子液。

本发明的微生物菌剂的制备方法步骤二中所述的基质选自微粉碳酸钙和/或沸石。

本发明通过大量筛选工作，筛选到了一株对花生叶斑病病菌有较强拮抗作用的拮抗菌BA-KA1，通过生理生化方法和16SrDNA方法将该菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。该菌株已于2013年10月15日进行保藏，保藏编号为CGMCC No.8341；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，邮编100101。

用上述能够拮抗花生叶斑病菌的BA-KA1菌株所生产的微生物制剂中含有5×10⁹个/g以上的解淀粉芽孢杆菌BA-KA1、相应培养基和助剂。其生产方法包括：

（1）将保存的解淀粉芽孢杆菌菌株BA-KA1划线转接到PB平板中，置于培养箱28℃恒温培养2天；