[发明专利]一种葡萄糖淀粉酶

说明书

技术领域：

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种葡萄糖淀粉酶及其应用。

背景技术：

葡萄糖淀粉酶（Glucoamylase，EC3.2.1.3），是水解淀粉的外切作用糖酶。它能把淀粉从非还原性未端水解α-1.4葡萄糖苷键产生葡萄糖，也能缓慢水解a-1.6葡萄糖苷键，转化为葡萄糖。同时也能水解糊精，从糖原的非还原末端释放β-D-葡萄糖。

多种细菌、真菌、酵母和植物都生产葡萄糖淀粉酶，并且工业上运用的葡萄糖淀粉酶大都来源于真菌。例如来自下列菌体：曲霉属（Aspergillus）（Svensson et al.,Carlsberg Res.Commun.48:529-544(1983);Boel et al.,Agric.Biol.Chem.53:923-929(1989);美国专利号5,024,941;美国专利号4,794,175和WO88/09795)；蓝状菌属（Talaromyces）(美国专利号4,247,637;美国专利号6,255,084;和美国专利号6,620,924);根霉属（Rhizopus）(Ashikari et al.,Agric.Biol.Chem.50:957-964(1986);Ashikari et al.,App.Microbio.Biotech.32:129-133(1989)和美国专利号4,863,864)；以及毛霉属（Mucor）(Houghton-Larsen et al.,Appl.Microbiol.Biotechnol.62:210-217(2003)等等。

目前国内外还没有粉红粘帚霉葡萄糖淀粉酶基因的研究报道，本发明运用分子克隆及基因工程技术手段从粉红粘帚霉菌中克隆出葡萄糖淀粉酶基因，并将其转入到黑曲霉G1中得到了高效表达。

发明内容：

本发明的目的是提供一种新型高产葡萄糖淀粉酶的菌株进而运用于工业生产。所述葡萄糖淀粉酶来源于粉红粘帚霉菌，本发明采用基因工程技术手段将来源于粉红粘帚霉菌的葡萄糖淀粉酶基因转化到黑曲霉G1中并且得到了高效表达。这种新型葡萄糖淀粉酶其特征在于：

1）其氨基酸序列为SEQ ID NO:1的葡萄糖淀粉酶；

2）在1）中的氨基酸上发生取代、缺失或添加一个或数个氨基酸得到的，具有1）中葡萄糖淀粉酶活性的酶。

本发明另一方面提供了编码上述葡萄糖淀粉酶的基因，其一种核苷酸序列为SEQ ID NO:2。

本发明提供了一种用于表达氨基酸序列为SEQ ID NO:1的葡萄糖淀粉酶的重组表达载体。

本发明还提供了一种能特异性表达这种新型葡萄糖淀粉酶的重组菌。

本发明所用的转化宿主菌为黑曲霉G1。

本发明的葡萄糖淀粉酶及上述的重组工程菌用于制备葡萄糖。

本次发明首次公开了粉红粘帚霉的葡萄糖淀粉酶基因，通过对重组菌进行摇瓶发酵实验并测得发酵液酶活高达292U/ml。本发明所述葡萄糖淀粉酶能从糖链的非还原端高效分解α-1,4-糖苷键，水解出葡萄糖，也能缓慢水解a-1.6葡萄糖苷键，转化为葡萄糖可广泛应用于淀粉糖工业。

附图说明：

图1：构建的重组表达载体pGm-3440示意图。

图2：重组菌发酵液上清SDS-PAGE电泳图，箭头所指地方为56KD的葡萄糖淀粉酶。

图3：葡萄糖淀粉酶活性随温度变化曲线。

图4：葡萄糖淀粉酶活性随pH变化曲线。

具体实施方式：

下面结合实例对本发明的方法做进一步说明。但实例仅限于说明，并不限于此。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常可按常规条件，如J.萨姆布鲁克（Sambrook）等编写的《分子克隆实验指南》中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件运行。本领域相关的技术人员可以借助实施例更好地理解和掌握本发明。但是，本发明的保护和权利要求范围不限于所提供的案例。

实施例1：葡萄糖淀粉酶基因的筛选