[发明专利]一种杨树胶中特有成分的分离纯化方法及应用

权利要求书

1.一种杨树胶中邻苯二酚的分离纯化方法，邻苯二酚分子式是C₆H₆O₂，其特征在于， 通过以下步骤实现：

（1）粗提物准备：取杨树芽，加入100%的乙醇，料液比1：10，超声提取30min，提取两次，过滤合并滤液，向滤液中加入体积比为1：3的超纯水，过滤，旋转蒸发去除乙醇，仅留水溶液；

（2）石油醚萃取：将步骤（1）得到的粗提水溶液经过石油醚等体积萃取两次，上相合并后再经超纯水等体积萃取一次后，合并下相溶液；

（3）氯仿萃取：将步骤（2）得到的提取液经氯仿溶液等体积萃取两次，下相合并后再经超纯水等体积萃取一次后，合并上相溶液；

（4）乙酸乙酯萃取：将步骤（3）得到的提取液经乙酸乙酯溶液等体积萃取两次，下相合并后再经乙酸乙酯等体积萃取一次后，合并上相溶液；

（5）将步骤（4）得到的提取液35℃减压蒸出溶液中的乙酸乙酯，将得到的固体提取物溶于超纯水中，料液比1:10；

（6）将步骤（5）得到的水溶液上样羟丙基葡聚糖凝胶树脂柱，上样后的羟丙基葡聚糖凝胶树脂用100%乙醇10BV洗脱，流速3ml/min，将洗脱液分管收集，每管0.5BV，共收集20管，分别进行未知峰检测，将富含有未知峰的溶液合并，在旋转蒸发仪上45℃蒸干得物质A粗提物；未知峰的出峰时间为12.5min左右；

（7）将步骤（6）得到的物质A粗提物溶于超纯水中，料液比1：3，采用流动相比例为乙腈：水=5：95等度洗脱的方式，在流速为8.0mL/min，检测波长为213nm，进样量为10μL，色谱柱为Shrmpack ODS-C18，色谱条件：20×250mm, 10μm，采用半制备型HPLC进行物质A的进一步分离纯化；将纯化得到的物质A溶液合并，在旋转蒸发仪上45℃蒸干得物质A；

（8）将步骤（7）所得的物质A 经过核磁共振、质谱鉴定化学结构以及通高效液相色谱对其进行验证，与文献报道进行核实，物质A为邻苯二酚。

2.根据权利要求1所述的一种杨树胶中邻苯二酚的分离纯化方法在杨树胶与蜂胶的真假鉴别中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述鉴别是通过与邻苯二酚标准品对照，如果在蜂胶样品中检测到邻苯二酚，则表明为杨树胶或者是掺有杨树胶的蜂胶，如果没有检测到邻苯二酚，则为蜂胶。