[发明专利]一种深海真菌次生代谢产物中的化合物EngyodontiuminA、制备方法及其用途

权利要求书

1.一种化合物EngyodontiuminA，其特征在于，其分子式为C₁₂H₁₅ClO₄，分子量为258.0659，具有如下结构式，

2.权利要求1所述化合物EngyodontiuminA的制备方法，其特征在于，包括如下步骤，

菌种的准备：使用海水PDA培养基，高温灭菌，制成平板，置于常温状态下，接种白色侧齿霉Engyodontium album菌丝体培养，作为菌种；所述海水PDA培养基成分为马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15-20g，1L海水；

发酵种子液制备：在多个锥形瓶中分别装入海水PDA液体培养基，高温灭菌后，接种上述菌种培养，将该培养物作为种子液；

接种：采用固体发酵方式，准备发酵瓶，加入大米固体发酵培养基，接种上述种子液，培养；所述大米固体发酵培养基为每1L的三角锥瓶装大米105g，小黄米45g，PDA培养基150ML，121℃，20min，高温灭菌；

萃取：待真菌发酵成熟后，加入乙酸乙酯500mL/瓶浸泡发酵产物，发酵产物溶入乙酸乙酯溶液中，浸泡后，将上层乙酸乙酯相倒出，下层为固体发酵产物；加入新的乙酸乙酯500mL/瓶，此步骤可反复多次，每次浸泡一段时间，如此制备得到乙酸乙酯初提液；以乙酸乙酯和所得到的乙酸乙酯初提液为混合溶剂，采用高压乳化切割机碾碎下层的固体发酵产物，胞内物质溶解到上述混合溶剂中，得到乙酸乙酯混合液,用旋转蒸发仪将乙酸乙酯混合液减压浓缩至固态浸膏，得到初级浸膏；

单体分离纯化：所得初级浸膏与正相硅胶拌样成粉状，，将拌好的粉末样品加入空柱中待分离；将装有粉末样品的柱子与正相硅胶柱连接，利用中压液相制备系统进行洗脱，设置正己烷-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇层析比例，在中压液相制备系统中接收分离后出峰信号，根据信号峰出峰的先后顺序依次收集峰值在200mA-2000mA的洗脱液，将洗脱液用旋转蒸发仪在35摄氏度24h真空浓缩为固态浸膏，即得到初级馏分15个,编号从F.1到F.15依次编号，每个初级馏分的量约是2g-3g；

初级馏分分别以少量甲醇溶解，加入合适的助溶剂待分离；采用反相C18制备柱进行次级馏分的制备，利用中压液相制备系统进行梯度洗脱，根据信号峰出峰时间收集洗脱液，将洗脱液用旋转蒸发仪在40摄氏度2-3天真空浓缩至固态浸膏，得到次级馏分，共得到88个次级馏分，编号从No.1到No.88依次编号，每个次级馏分的量是20mg-300mg；

第NO.14的次级馏分采用高效液相色谱仪处理，仪器上体现目标化合物的出峰时间在25min左右，然后采用高压反相C18制备柱制备收集得到化合物EngyodontiuminA。

3.权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述菌种的准备中，所述高温灭菌为121℃，20min；所述培养为于28℃下静置培养4-5天；

任选的，所述发酵种子液制备中，高温灭菌为121℃，20min；所述培养为28℃下以180rpm/min振荡培养2-3天；

任选的，所述接种为中种子液的接种量为15%；28℃培养箱放置28天；

4.权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述萃取中，每瓶加入乙酸乙酯500mL浸泡发酵产物，所述浸泡时间为24h，所述多次可以是三次，每次浸泡24h；所述混合溶剂中，乙酸乙酯与乙酸乙酯初提液的体积比为2：3；所述减压浓缩条件为2-3h，35℃。

5.权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述单体分离纯化中，所得初级浸膏与正相硅胶的重量比例为1:3左右；所述正相硅胶柱规格为；所述正己烷-乙酸乙酯体积比例为80:20,60:40,40:60,20:80,0:100，所述乙酸乙酯-甲醇体积比例为70:30,0:100；所述洗脱液减压浓缩条件为每个样1-2h，35℃；

初级馏分以少量甲醇溶解，比如1mL，加入四氢呋喃，500μL待分离；采用反相C18制备柱进行次级馏分的制备，利用中压液相制备系统，设置洗脱条件为：乙腈：水=100:0-0:100梯度洗脱，根据信号峰出峰时间收集洗脱液，减压蒸馏，6-7天，40℃，至固态浸膏，得到次级馏分，共得到88个次级馏分，依次编号No.1-No.88。

6.权利要求1所述化合物EngyodontiuminA用于抗菌的用途。