[发明专利]一种天兰草活性提取物的关键生产技术与鉴别方法

说明书

技术领域

本发明是关于一种天兰草活性提取物的关键生产技术与鉴别方法，属于生物化工技术领域。

背景技术

天兰草为马鞭草科一年生或多年生直立或半藤本状灌木，高0.5-2米，茎枝无刺或有弯钩刺，稍被毛。叶对生，卵形或矩圆状卵形，长3-9厘米，宽2-3.5厘米，先端渐尖，基部阔楔形，边缘有钝齿，上面粗糙而有短刺毛，下面被小刚毛。全年开花，腋生，初为黄色、淡红色，渐变橙色或深红色，头状花序，稠密，苞片狭长，花冠长约1厘米。核果球形，肉质，长约5毫米，成熟时紫黑色，有骨质的小分核2颗。民间用其治疗头痛、小儿嗜睡和妇女阴痒，但其药用价值还没有得到全面开发利用。

发明内容

技术问题：本发明的目的在于提供一种天兰草活性提取物的关键生产技术与鉴别方法。

解决方案：本发明为了达到上述目的而采用的技术解决方案如下。

本发明所述天兰草活性提取物的关键生产技术是将药用植物天兰草的根、茎、叶、果或全草的甲醇提取物经过活性炭脱色、水-氯仿分配萃取、甲醇重结晶进一步纯化，得到白色晶体状的天兰草活性提取物。该提取物经硼氢化钠处理后与乙酸酐-浓硫酸混合后可呈现特殊的显色反应，据此方法可快速对其进行定性鉴别。

发明有益效果：本发明的有益效果是采用本发明的关键生产技术可以高效获得白色晶体状的天兰草活性提取物，并可以通过本发明发现的特殊显色反应对其进行快速定性鉴别。另外，本发明的抗菌试验结果证明，上述天兰草活性提取物对供试病原菌具有显著的抑制作用，可作为天然的具有抗菌消炎、祛疹止痒、清除头皮屑等功效的活性添加剂应用于抗菌药物和日用保健品的制备。

具体实施方式：以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1 天兰草活性提取物的关键生产技术。

采集药用植物天兰草的根、茎、叶、果或全草，风干，粉碎，称取1kg药粉，加入5L甲醇于50℃以下浸泡提取24h，浸泡期间不时摇晃，过滤，得甲醇浸泡提取液和药渣，药渣再加入5L甲醇重复提取一次。甲醇浸泡提取液合并，加入200g活性碳于50℃以下搅拌脱色，抽滤得金黄色滤液，滤液于50℃以下减压浓缩回收甲醇后得到提取浸膏，将提取浸膏悬浮于水中，用等体积氯仿萃取2次，氯仿萃取液合并于50℃以下减压浓缩回收氯仿后得到氯仿萃取物，氯仿萃取物加适量甲醇微热溶解，于-18℃静置24h，析出大量白色晶体，抽滤，晾干，得天兰草活性提取物。

实施例2 天兰草活性提取物定性鉴别。

乙酸酐-浓硫酸（9∶1）混合试剂：用时新鲜制备，制备方法是在不断搅拌下将预先冷却好的浓硫酸加入到在冰浴冷却下的乙酸酐中。

定性鉴别方法：取1mL浓度为1mg/mL的天兰草活性提取物的甲醇溶液置于一干燥干净的试管中，然后加入适量硼氢化钠固体试剂，将试管置于沸水浴中加热完全挥发掉甲醇试剂，待试管冷却至室温后，加入3mL乙酸酐-浓硫酸（9∶1）混合试剂，颜色变化依次出现红色、紫色、蓝色，最后变为绿色。红色、紫色和绿色时间非常短暂，但蓝色相对稳定。这是本发明发现的天兰草活性提取物的特有显色反应，可据此进行鉴别。

实施例3 天兰草活性提取物体外抑菌活性药敏实验。

采用纸片琼脂扩散法测定天兰草活性提取物的抑菌活性，根据纸片扩散法抑菌结果判断标准，抑菌圈直径＞20 mm为极敏，15-20 mm为高敏，10-15mm为中敏，＜10mm为低敏，无抑菌圈则不敏感。供试细菌有金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureu）、大肠杆菌（Escherichia coli）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），供试真菌有腐皮镰刀菌（Fusarium solani）和寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）。以DMSO为溶剂将上述天兰草活性提取物配制成浓度为5mg/mL的药液，以纯溶剂DMSO为空白对照，链霉素为阳性对照，接种后细菌于37℃孵育24h（真菌48h）后测定抑菌圈直径大小，平行实验三次，取平均值。试验结果抑菌圈直径分别为：金黄色葡萄球菌20mm、大肠杆菌21mm、绿脓杆菌37mm和枯草芽孢杆菌22mm、腐皮镰刀菌59mm和寄生曲霉30mm。

抑菌活性药敏实验结果表明，在浓度为5mg/mL时，天兰草活性提取物具有有效抑制革兰氏细菌和靶真菌增殖的作用。因而可作为天然的具有抗菌消炎、祛疹止痒、清除头皮屑等功效的活性添加剂应用于抗菌药物和日用保健品的制备。