[发明专利]一种减少溶媒使用的提取高纯度恩拉霉素的方法

权利要求书

1.一种减少溶媒使用的提取高纯度恩拉霉素的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

1）恩拉霉素发酵液经热处理后真空抽滤，待恩拉霉素发酵液完全过滤后，得到的滤饼用2～4倍恩拉霉素发酵液体积的去离子水洗涤两次，每次都减压抽至无水滴流出，收集湿菌丝体；

2）将收集好的湿菌丝体称重后放入大烧杯中，加入1～3倍湿菌丝体体积的去离子水和4～7倍湿菌丝体体积的甲醇或乙醇搅拌均匀，用盐酸溶液调节PH至2.0～4.5后，在压力60～100MPa，温度30～40℃下，用匀浆机对调节好PH的菌丝体溶液进行破碎，得到的破碎液用离心机离心，收集上清液，再用1～3倍湿菌丝体体积的浓度30%～70%甲醇水或乙醇水分2～3次洗涤滤渣，离心，收集清液；

3）混匀上述清液后用氢氧化钠溶液调节PH至5.9～6.1,按中和液体积的1～2%加入助滤剂，搅拌均匀，抽滤，收集滤液；滤渣用浓度30%～70%甲醇水或乙醇水溶液淋洗，收集清液，将清液与滤液混合形成混合液；

4）混合液采用纳滤膜进行纳滤浓缩分离，浓缩至原体积的1/5，分别收集浓缩液和渗透液，收集到的渗透液可以代替去离子水和甲醇循环使用；

5）往浓缩液中加入2～4倍湿菌丝体体积的浓度40%～70%甲醇水或乙醇水稀释后，加入0.5%的氯化钠，用物质的量为2～10mol的氢氧化钠溶液调节PH至6.9～7.1，静置30分钟后，过滤，收集的滤液以每小时通过2倍量树脂柱体积的流速通过已预处理的阳离子交换树脂柱脱色，收集脱色液；

6）将脱色液按照每小时通过0.5倍量树脂柱体积的流速分别通过装有弱酸性大孔吸附树脂和弱碱性大孔吸附树脂的串联树脂柱进行吸附后，用含氯化钠质量分数为0.5%、浓度为50%的甲醇或乙醇溶液洗涤，再用4L浓度为50%甲醇或乙醇溶液洗涤，接着用1～3倍量吸附树脂体积、PH为4.0、浓度为40%～70%的甲醇水或乙醇水洗脱两次，最后用物质的量为0.006mol浓度为40%～70%的甲醇水或乙醇水洗脱至流出液单位低于100ug/ml，分别收集同种物质洗提液；

7）将收集到的同种物质洗提液通过高压制备梯度系统进行分离纯化，得到恩拉霉素纯度达99.5%以上的溶液；

8）上述的溶液经减压浓缩至原体积的倍，然后用物质的量为2～10mol的浓盐酸调节PH至0.85，在0～10℃下静止一天后，离心分离，得到固形物；

9）固形物用水洗净后，在压强小于-0.08MPa、35～45℃的条件下干燥4～8小时，最后得到白色晶体状的恩拉霉素。

2.根据权利要求1所述的一种减少溶媒使用的提取高纯度恩拉霉素的方法，其特征在于：所述步骤3）中加入的助滤剂为硅藻土、珍珠岩、纤维素或石棉。

3.根据权利要求1所述的一种减少溶媒使用的提取高纯度恩拉霉素的方法，其特征在于：所述步骤4）中采用的纳滤膜截留分子量为200～500，渗透液流速控制在200～350L/h，浓缩压力控制在1.0～2.4MPa范围，浓缩液温度控制在25℃～45℃。