[发明专利]一种矿区环境样品微生物基因组DNA与总RNA同时提取的方法

权利要求书

1.一种矿区环境样品微生物基因组DNA与总RNA同时提取的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤，

步骤S1.环境样品的预处理，通过离心的方法收集液体样品中的微生物或通过过滤的方法剔除固体样品中的杂质；

步骤S2.细胞的破碎，将步骤S1中预处理好的样品与灭菌的石英砂混合后加入液氮研磨三次，再加入pH值为7.0的PIPES抽提缓冲液和十二烷基磺酸钠溶液在65℃下裂解细胞1小时；

步骤S3.核酸纯化与沉淀，裂解细胞完毕后通过离心的方法收集上清液，并向上清液中加入萃取剂离心萃取蛋白与脂类，待萃取后，上清液用冰冻的异丙醇或乙醇沉淀并离心获取总核酸，总核酸经过分离即可得到宏基因组DNA与总RNA。

2.根据权利要求1所述的矿区环境样品微生物基因组DNA与总RNA同时提取的方法，其特征在于：在所述步骤S3中还包括向经过异丙醇沉淀并离心获取的总核酸中加入2mL浓度为70％的乙醇充分洗涤，并在离心力为12000×g的条件下室温离心15min，再收集沉淀的总核酸，弃去上清液，在室温下干燥20-30min，待乙醇挥发完后，加入50-200μL的TE缓冲液溶解，即获得总核酸溶液。

3.根据权利要求2所述的矿区环境样品微生物基因组DNA与总RNA同时提取的方法，其特征在于：若步骤S3中所得总核酸的A_260／230比值低于1.8，则可向总核酸中加入1／10体积的3M NaOAc和2.5体积无水乙醇后混匀，静置于-20℃冰箱中30min后，再在离心力为12000×g的条件下室温离心30min后收集总核酸。

4.根据权利要求1所述的矿区环境样品微生物基因组DNA与总RNA同时提取的方法，其特征在于：所述步骤S2中的PIPES抽提缓冲液的配方为，0.1M PIPES钠盐，0.1M EDTA，1.5M NaCl和1％CTAB，并且PIPES抽提缓冲液的加入量为16.5mL。

5.根据权利要求1所述的矿区环境样品微生物基因组DNA与总RNA同时提取的方法，其特征在于：所述步骤S2中的石英砂的加入量为2-5g，并且在加入后须与样品混匀混合。

6.根据权利要求1所述的矿区环境样品微生物基因组DNA与总RNA同时提取的方法，其特征在于：所述步骤S2中的十二烷基磺酸钠溶液的浓度为(质量体积比)20％，其加入量为：1.83mL。

7.根据权利要求1所述的矿区环境样品微生物基因组DNA与总RNA同时提取的方法，其特征在于：所述步骤S3中的萃取剂为氯仿和异戊醇的混合液，该氯仿和异戊醇的体积比为24∶1；并且萃取剂的加入量为与所萃取上清液的体积相等。

8.根据权利要求1所述的矿区环境样品微生物基因组DNA与总RNA同时提取的方法，其特征在于：所述步骤S3中用于沉淀上清液的异丙醇或乙醇为100％纯度，并且异丙醇或乙醇的加入量与所沉淀上清液的体积比为0.6∶1。

9.根据权利要求1所述的矿区环境样品微生物基因组DNA与总RNA同时提取的方法，其特征在于：所述步骤S3中离心萃取蛋白与脂类的条件为在离心力为6000×g的条件下室温离心10min。

10.根据权利要求1所述的矿区环境样品微生物基因组DNA与总RNA同时提取的方法，其特征在于：所述步骤S3中离心获取总核酸的条件为在离心力为12000×g的条件下室温离心30min。