[发明专利]灰树花多糖F2的制备方法及其降血糖功能

说明书

技术领域：

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种具有降血糖作用的灰树花多糖F2及其制备方法和用途。

背景技术：

糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢紊乱综合症，全世界糖尿病患者以每年6%的速度增加。预计在2010年至2030年间，发展中国家的成年人总患病者会增加69%，发达国家会增加20%。糖尿病分为1型和2型糖尿病，其中2型糖尿病占整个总数的90%以上。目前的医学尚不能攻克糖尿病，糖尿病的治疗主要以长期服用药物控制和缓解病情，然而目前临床使用药物多为化学药物或生化药物，毒副作用的长期积累对人体的影响很大。这一严峻形势促使对糖尿病药物的新药开发重点转向从自然界中寻找天然、安全、疗效确切的新型活性成分。

马迅从人工培养的灰树花子实体中得到了一种降血糖活性多糖—分子量为400-450KD的α葡聚糖。Kubo等在进行灰树花子实体多糖分离过程中，经过热水提取物中再加入一倍量乙醇后产生了悬浮物，离心分离后得到了一种糖蛋白，即X-组分（糖：蛋白=65：35），具有显著的降血糖活性，其相对分子质量5×10⁵D，结构分析表明，X-组分具有α-1，4-分支的β-1，6-葡聚糖。

现代药理学研究结果表明，血糖的降低可以通过升高胰岛素的含量，也可通过调节与糖代谢相关酶的活性，而促进葡萄糖的氧化利用，还可通过改善胰岛素抵抗或抑制葡萄糖吸收等而实现。

从灰树花子实体中提取得到的MT-α葡聚糖的作用机制可能是通过增加胰岛素受体的数目从而增加胰岛素敏感性和改善周围组织对胰岛素的抵抗。灰树花水溶性提取物FXM很可能是通过改善对胰岛素的抵抗达到降糖活性的。灰树花子实体糖蛋白SX则可以改善葡萄糖耐量性；增加身体对胰岛素的敏感性。

虽然目前已经发现灰树花及其活性成分具有显著的降血糖作用，但由于其化学结构复杂，绝大多数降血糖活性物质的成分、结构及其作用机理未能明确，直接阻碍了它们被开发成治疗糖尿病新药的进程。

发明内容：

本发明的目的是提供一种具有降血糖作用的新的灰树花多糖F2及其制备方法。

本发明的灰树花多糖F2是通过以下方法制备的，该方法包括以下步骤：

（a）取灰树花（Grifola frondosa）子实体，粉碎用热水抽提，然后再过滤，在滤液中加入乙醇沉淀，分离沉淀；

（b）沉淀上DEAE Sepharose Fast Flow色谱柱，先用Tris-HCl（10mM,pH=8.0）平衡，收集得到馏分F1；接着用含0.1M NaCl的Tris-HCL（10mM,pH=8.0）洗脱，得到馏分F2，F2减压浓缩，透析，干燥得灰树花多糖F2。

步骤（a）中所述的沉淀，优选先溶解于热水中，用0.45_μm直径的微孔滤膜过滤，滤液装入3000D孔径的透析袋透析24h，得粗多糖溶液，再调整粗多糖溶液中灰树花粗多糖的浓度，将此粗多糖溶液作为样品进行步骤（b）的上样层析分离。

该灰树花多糖F2分子量为4.52×10⁵D，多糖含量为95.6%，蛋白含量为3.6%，多糖主要由葡萄糖、甘露糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖组成，氨基酸组分主要是脯氨酸（Pro）、丝氨酸（Ser）、天冬氨酸（Asp）、赖氨酸（Lys）、丙氨酸（Ala）、谷氨酸（Glu）、苏氨酸（Thr）、甘氨酸（Gly）、精氨酸（Arg）、亮氨酸（Leu）和缬氨酸（Val），为β-吡喃糖环杂多糖，并且含有糖醛酸。根据上述参数，与现有技术中的灰树花多糖进行比较，没有发现相类似的，因此本发明的灰树花多糖F2是一个新的灰树花多糖。

取灰树花多糖F2进行体内降血糖试验，结果表明灰树花多糖F2连续灌胃7天，可以显著降低糖尿病大鼠的空腹血糖（*P<0.05），其降血糖机理主要是改善胰岛素抵抗，从而降低血糖。

因此本发明的第二个目的是提供灰树花多糖F2在制备治疗糖尿病药物中的应用，尤其是在制备治疗2型糖尿病药物中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种治疗糖尿病的药物，其特征在于，该药物以灰树花多糖F2作为活性成分。

所述的糖尿病为2型糖尿病。

本发明从灰树花子实体中分离出一种新的灰树花多糖F2，该灰树花多糖F2具有降血糖活性，可以用于制备治疗糖尿病的药物，尤其是治疗2型糖尿病的药物，为开发治疗糖尿病的新药打下基础，积极推动糖尿病天然药物活性成分的研究开发。

附图说明：