[发明专利]一种补骨脂二氢黄酮甲醚C环羰基还原产物及生物制备方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物制药及医药工程领域，尤其是一种补骨脂二氢黄酮甲醚C环羰基还原产物及生物制备方法。

背景技术

补骨脂二氢黄酮甲醚（Bavachinin）是一种二氢黄酮类化合物，其化学结构是在二氢黄酮骨架的A环7号位取代了一个甲氧基，A环6号位取代了一个异戊烯基。研究表明，该化合物具有抗氧化、抗细菌、抗真菌、抗炎、抗肿瘤、退热性、止痛等多种生物和药理活性。目前主要从天然植物Psoralea corylifolia中分离得到，但由于较低的分离和纯化效率，生产成本较高，导致其临床应用受到极大限制。因此，通过结构修饰和改造获得结构多样的新化合物，是提高该化合物生物利用度的重要方法。

二氢黄酮类化合物的结构修饰和改造工作中，还原反应的发生及其发生的位点与它的药理活性密切相关。目前二氢黄酮类化合物还原产物的化学制备方法具有反应效率低、大量使用有机溶剂、产物分离纯化困难等问题。

目前尚无利用微生物菌种制备补骨脂二氢黄酮甲醚C环羰基还原产物的生物制备方法的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种目标产物产率高、分离纯化过程简单、成本低廉、无污染的补骨脂二氢黄酮甲醚C环羰基还原产物及生物制备方法。

本发明实现目的技术方案如下：

一种补骨脂二氢黄酮甲醚C环羰基还原产物，结构式如下：

一种补骨脂二氢黄酮甲醚C环羰基还原产物的方法，以补骨脂二氢黄酮甲醚为底物，采用雷斯青霉（Penicillium raistrickii） ATCC 10490为生物催化剂进行转化反应，获得在补骨脂二氢黄酮甲醚C环羰基发生还原反应的衍生物。

而且，具体步骤如下：

⑴生物催化剂的制备：制备浓度为10⁵-10⁸个/ml的雷斯青霉（Penicillium raistrickii） ATCC 10490的孢子悬浮液，以5%-15%的接种量接种于新鲜的发酵培养基中，26-30℃，120-200r/min培养24-60h，得到菌体发酵液；

⑵转化反应：向菌体发酵液中投入已经溶解的补骨脂二氢黄酮甲醚，26-30℃，120-200r/min，培养24-120h后终止反应；

⑶产物的提取与精制：转化反应结束后，抽滤，分离菌丝体和发酵液，分别用有机溶剂萃取菌丝体和发酵液，合并萃取液，干燥，减压浓缩，浓缩后用硅胶色谱柱分离获得补骨脂二氢黄酮甲醚C环羰基还原产物。

而且，分离获得的补骨脂二氢黄酮甲醚C环羰基还原产物是利用有机溶剂通过重结晶得到在补骨脂二氢黄酮甲醚C环羰基发生还原反应的衍生物的纯品。

而且，所述用于重结晶的有机溶剂为石油醚、丙酮、正己烷、乙腈或甲醇。

而且，所述发酵培养采用的培养基组成g/L:葡萄糖5-30，玉米浆5-15，NaNO₃1-3，KH₂PO₄0.5-2，K₂HPO₄1-3，MgSO₄0.2-1，FeSO₄0.01-0.03，KCl0.2-1，pH7.0-8.0。

而且，所述补骨脂二氢黄酮甲醚投入的终浓度为：0.01-0.1g/L。

而且，所述步骤⑵中溶解补骨脂二氢黄酮甲醚的有机溶剂为乙醇、甲醇、二甲基亚砜或二甲基甲酰胺。

而且，所述的用于萃取处理的有机溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、甲醇或乙酸丁酯。

一种补骨脂二氢黄酮甲醚C环羰基还原产物用于制备抗肿瘤药物的应用。

本发明的优点和积极效果如下：

1、本发明首次利用微生物转化法对补骨脂二氢黄酮甲醚C环进行羰基还原反应，以补骨脂二氢黄酮甲醚为底物，采用雷斯青霉ATCC 10490为生物催化剂，转化生成在补骨脂二氢黄酮甲醚C环羰基发生还原反应的衍生物。

2、本方法克服了现有化学方法制备这类羰基还原产物过程中反应步骤多、反应效率低、产物分离纯化困难等缺点，具有目标产物产率高、分离纯化过程简单、成本低廉、无污染等优点。

3、本发明制备得到的补骨脂二氢黄酮甲醚C环羰基还原产物是结构新颖的新化合物，对正常细胞有一定的促进增殖作用，具有和底物相当或者更好的抗肿瘤活性，丰富了补骨脂二氢黄酮甲醚这类化合物作为药剂使用的应用范围。

附图说明