[发明专利]人肾母细胞瘤过度表达基因编码蛋白酶联免疫试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析技术领域中的一种检测人肾母细胞瘤过度表达基因编码蛋白(NOV蛋白)的双抗体夹心ELISA试剂盒。

背景技术

人肾母细胞瘤过度表达基因编码蛋白(Nephroblastoma-overexpressed gene protein homolog，NOV)，即NOV蛋白，也称为CCN3蛋白(CCN family member3)或胰岛素样生长因子结合蛋白9(Insulin-like growth factor-binding protein9，IGFBP9)。NOV蛋白属于CCN家族，该家族是由一组结构相似的分泌性糖蛋白组成，目前已知的家族成员包括CCN1到CCN6共六种蛋白。CCN家族蛋白在细胞的增殖、分化和黏附以及血管形成、肿瘤发生和进展过程中均具有重要作用。

NOV有多种不同的生理作用，例如有研究显示NOV具有促进人神经干细咆增殖及促进其向神经元分化的作用，延缓TGF-β1所致的肾小管转分化进程以及在妊娠糖尿病的发生中起重要作用等。另外，NOV蛋白也可作为妊娠先兆子痫的早期诊断标志物。同时，已有许多研究结果显示NOV是一个新型的肿瘤的标志物：NOV含量与黑色素瘤的细胞恶性程度呈正性相关；过量表达NOV蛋白可促进食管癌细胞的生长、迁移和侵袭；NOV在宫颈癌组织中的表达阳性率明显高于在正常宫颈组织中的表达阳性率，且NOV的表达与宫颈癌的肿瘤大小及淋巴结转移等有显著相关性，说明NOV的表达与宫颈癌的发生和发展有关，被认为可作为宫颈癌的诊断及临床监测的分子标志物；有研究者认为NOV是判断肿瘤恶性程度，即细胞黏附和侵润的标志物。

NOV作为重要的生物标志物，其准确快速的检测对肿瘤发生机理的研究、发展情况的跟踪、预后判断以及临床治疗是十分关键的，所以需要建立一种简便、有效、可用于对各类常见样本如血清、血浆进行高通量快速检测的技术方法。与其它技术相比，固相酶联免疫法因为灵敏度高、特异性好、检测成本低、操作简单、适合大批量样本检测等优势而已被广泛应用于各种重要生物标志物的分析检测中。目前国内常用NOV蛋白酶联免疫试剂盒主要依靠进口，价格昂贵，到货周期长，而且国内尚没有经国家药监局批准的NOV蛋白临床诊断用产品，因此亟需开发相关抗体及试剂盒，支持国内NOV蛋白的各项基础研究，打破进口产品的市场垄断，并为进一步研制临床体外诊断试剂提供关键材料，加速产品开发，填补国内空白。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测灵敏度高、准确性强、低成本的人肾母细胞瘤过度表达基因编码蛋白(NOV蛋白)的双抗体夹心ELISA试剂盒。

本发明所提供的检测试剂盒包括特异性的NOV蛋白包被抗体，酶标记的NOV蛋白检测抗体以及NOV蛋白的标准品。

其中所述NOV蛋白包被抗体为鼠单克隆抗体，其轻链和重链氨基酸序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，所述酶标检测抗体为兔多克隆抗体，所述NOV蛋白标准品为重组NOV蛋白。

所述单克隆抗体采用重组NOV蛋白免疫动物，利用杂交瘤技术制备获得。所述多克隆抗体采用重组NOV蛋白免疫动物，通过蛋白A纯化和抗原亲和纯化技术制备获得。酶标抗体按照常规方法利用辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase，HRP)标记抗体获得。

本发明的技术方案为优选高灵敏度、高特异性的单克隆抗体和多克隆抗体进行配对组合，将单克隆抗体作为包被抗体吸附于固相载体上，包被抗体可以特异性的捕获样本中的NOV蛋白以及NOV蛋白标准品，加入酶标检测抗体后，形成包被抗体、抗原、检测抗体复合物，相应底物显色后终止，读取样本吸光值，与标准曲线比较即可得出NOV蛋白的含量。

本发明采用双抗夹心法定性或定量检测样本中的NOV蛋白水平，检验方法方便易行、检测灵敏度和准确度高、特异性强、能够同时快速检测大批量样本，试剂盒主要组成部分的包被和检测抗体均为自主研发，因此成本低、可靠性强，将在NOV蛋白的相关基础和临床研究中发挥重要作用。

附图说明

图1.NOV蛋白酶联免疫试剂盒的检测标准曲线图

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明做进一步的描述和说明。

实施例1酶联免疫检测试剂盒的组分制备

1、重组NOV蛋白标准品的制备