[发明专利]一种提高多胎生哺乳动物移植胚胎利用率的方法

说明书

技术领域

本发明涉及哺乳动物胚胎移植领域，更具体地涉及一种提高多胎生哺乳动物移植胚胎利用率的方法。 

背景技术

动物克隆是获得转基因动物常用的重要的技术手段之一。克隆技术通过物理去除卵细胞核或化学方法(Fulka and Moor,1993)使卵细胞遗传物质失去作用，利用电击法或直接显微注射法将单个有核细胞转移至卵细胞内，再通过物理或化学方法将重构的胚胎激活，使其发育成胚胎，并移植入代孕母体内，得到克隆个体。 

1996年，英国科学家Wilnut以成年羊的乳腺细胞为核供体，首次得到利用体细胞克隆羊Dolly(Wilmut et al.,1997)，建立了动物细胞克隆新里程。1998年，日本科学家Wakayama将卵丘颗粒细胞通过胞浆内注射，注入到已去除核物质的小鼠卵细胞，获得了世界上第一只体细胞克隆小鼠(Wakayama et al.,1998)。在此之后其他物种大量的克隆动物出生，如牛(Kato et al.,1998)、猪(Polejaeva et al.,2000)、猫(Shin et al.,2002)、马(Galli et al.,2003)、狗(Lee et al.,2005)等。以上科研成果都需依赖昂贵、精密的显微操作系统，并且对实验操作人员的技术技术水平有很高的要求，不适合进行大规模的克隆动物生产。我们称依赖显微操作仪的克隆技术为传统克隆技术。 

为了简化实验设备，降低克隆技术的难度，2001年，丹麦科学家Gavor Vajta首次提出利用刀片切割卵细胞，以极体定位，去掉极体及卵细胞靠近极体的部分胞质的方法去核，该方法称为手工克隆技术(Vajta et al.,2001)。手工克隆 技术的出现，可以使操作人员完全摆脱显微操作系统，降低了克隆技术的仪器投入以及对操作人员技术水平的要求，从而使技术成本及人工成本降低，使克隆这项技术应用于未来的产业化成为可能。2003年、2007年分别获得世界第一只手工克隆牛和世界第一只手工克隆猪(Du et al.,2007;Vajta et al.,2003)。目前通过传统克隆技术体外培养的胚胎，其囊胚率在20%-30%之间，而手工克隆动物囊胚率能提高至40%-60%，但克隆个体的出生率及存活率与传统克隆技术无差异，仍处于较低的水平。 

此外还可以通过物理或化学手段使卵细胞发育成胚胎，这种方法称为孤雌激活(Parthenogenetic Activation;PA)。孤雌激活胚胎移植到动物体内后，可在代孕受体子宫内着床并发育，但发育至一定阶段后逐步退化，无法得到存活个体(McGrath and Solter,1984;Surani and Barton,1983)。 

猪的肉质、繁殖力、抗病力与其遗传物质有决定性的关联。目前肉猪市场上，多数引进国外种猪或种猪精液，如杜洛克、长白猪、皮特兰等，都是从欧洲经过空运或海运到达中国，途中对猪产生的应激作用会使猪死亡、消瘦、体质减弱等，对经营者造成损失，并且一只优良种猪的诞生是经过繁杂的选育过程得到的。选择具有优良品质的种猪进行克隆，可在短时间内得到品质良好的种猪，降低运输、饲养、选育成本。最为紧迫的事实是，由于大规模地引进、饲养国外猪种，我国的本地猪种面临消失的局面，克隆技术可对本地猪种保存、繁育。我国的本地猪有抗病性强、产仔多、肉质好的特点，如巴马猪、五指山猪、藏香猪等。在医学领域中，疾病模型对医学研究、临床应用有重要意义。猪的代谢途径、内脏结构、器官大小与人类相似，通过转基因技术与克隆技术相结合，可以批量得到的转基因克隆猪，应用与器官移植、新药的开放等 领域上。但目前全球对克隆效率低的现状未有突破，提高克隆胚的利用率是现实所趋。在克隆胚胎的移植中加入一定数量的孤雌激活胚胎，对每天有限的克隆胚胎进行更多的代孕受体移植，提高了克隆胚胎的利用率。