[发明专利]一种微生物复合肥料的制备方法

说明书

技术领域：

发明涉及农业技术中的肥料，涉及一种新型的微生物复合肥料的制备方法。

背景技术：

现有的生物肥料大多是单一性的生物肥料。如：固氮菌肥，主要由具有固氮作用的细菌和真菌组成；又如：磷细菌，其功能是分解土壤中的有机磷，使之变为易于被植物吸收的磷素；再如：细菌，其功能是分解土壤中的钾化合物，使之成为能被植物吸收利用的速效钾。这些肥料在单独使用时均能发挥各自作用，部分满足植物对氮，磷，钾三要素的需要。它们不会产生长期使用化肥所造成的土壤板结现象。但其不足在于：单独使用上述三类生物肥料只能解决植物所需营养的一个方面，且成本较高，用量大，同时，将三者配合使用，又因难于做到比例适当而造成施肥量的不足或浪费。长期使用单一的或复合的生物肥料的实践证明，它们只能替代化肥的30%以下。

发明内容：

本发明的发明目的是提供一种能针对我国土壤肥力的基本情况，开发一种微生物复合肥料的制备方法。

本发明的技术解决方案是：

一种微生物复合肥料的制备方法，包括如下步骤：将特选的黑曲霉培养物、枯草芽孢杆菌分别进行培养、发酵，然后将发酵产物按比例组合为微生物复合肥料。

所述微生物复合肥料的重量份数组成为：黑曲霉培养物20-50份、枯草芽孢杆菌菌剂20-35份；

所述黑曲霉培养物制备：菌种培养，采用常见固体发酵培养方法：孢子液接种到固态发酵培养料中，26-33℃培养至菌丝长满培养料，低温流化床干燥，粉碎干燥物。

有益效果：

实验表明，使用本品可提高粮食产量8-30%，提高蔬菜产量10-40%，还可改善蔬菜、粮食的品质和风味。每亩土地使用本发明的肥料的量为60-100克，是目前国内外使用量较少的微生物复合肥料之一。

每亩使用量为80-200克。在本发明微生物复合肥料中加入120倍的自来水和6倍的尿素，在22℃以上45℃以下的水温中活化28小时，然后连同化肥（按照上年使用量的50%）洒入土壤中。最好作基肥，每年使用1-3次。

具体实施方式：

下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。1、菌剂培养制备：

枯草芽孢杆菌剂培养制备：枯草芽孢杆菌菌剂制备：从斜面转接培养枯草芽孢杆菌，逐级扩培后的种子液转接入发酵罐中，发酵完毕离心分离获得湿菌体和发酵液；发酵完毕发酵液经低温负压真空浓缩到原体积的40-50%，得到菌浓缩液。添加载体：向浓缩液中添加混合好的载体，混合均匀；浓缩液与载体的重量比为0.5-0.7:1，载体组成为：CaCO₃20-40份，糊精10-20份。流化床干燥，干燥温度50℃。

黑曲霉培养物制备：菌种培养，固体发酵培养：孢子液接种到固态发酵培养料中，26-35℃培养至菌丝长满培养料，低温流化床干燥，粉碎干燥物；

本发明提供的产耐高温α-淀粉酶的菌株具体为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）Li-2013-02。该菌株已于2013年7月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏号为CGMCC No.7926。

所述菌株特点如下：

所述菌株在固体平板上菌落颜色为乳白色，表面干燥不透明，边缘整齐，为具有运动性的好氧菌。镜检为长杆状，革兰氏染色呈阳性。该菌可利用柠檬酸盐，硝酸还原、V-P实验成阳性。

所述枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）Li-2013-02由一株保藏于本实验室的产耐高温α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌Li-2013经紫外线-氯化锂-硫酸二乙酯复合诱变筛选获得，具体筛选步骤如下：

（1）菌悬液的制备

将在平板划线分离后长出的Li-2013单菌落接入种子培养基中，100r/min，40℃培养12h后，取1mL培养液离心后用生理盐水洗涤两次，并重悬与9mL生理盐水中。

（2）紫外线-氯化锂-硫酸二乙酯复合诱变

将菌悬液置于无菌平板中，在距离为30cm，功率15w的紫外灯下搅拌照射100s。将经过照射的菌液经梯度稀释后涂布于氯化锂平板，并以未经紫外照射的菌液稀释涂平板做对照。将上述涂布均匀的平板，用黑色的布或报纸包好，置40℃培养48h，在长出菌落的平板上筛选出水解圈与菌落直径比值最大者挑至斜面保存，纯化后配制成菌悬液，经梯度稀释后与硫酸二乙酯原液充分混合，并于40℃震荡处理40min，将处理过的菌液经梯度稀释后涂布于氯化锂平板。

（3）高产菌种的初筛