[发明专利]一种高效复合生物肥料的制备方法

权利要求书

1.一种高效复合生物肥料的制备方法，其特征在于，将特选的黑曲霉培养物、解磷巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌分别进行培养、发酵，然后将发酵产物按比例组合； 

所述高效复合生物肥料，由如下重量份数的原料组成：黑曲霉培养物20-50份、解磷巨大芽孢杆菌5-10份、枯草芽孢杆菌菌剂10-30份。 

2.根据权利要求1所述高效复合生物肥料的制备方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）Li-2013-02保藏号为CGMCCNo.7926。 

3.根据权利要求1所述高效复合生物肥料的制备方法，其特征在于，黑曲霉（Aspergillus niger）保藏号为CGMCCNO.7927。 

4.根据权利要求1所述高效复合生物肥料的制备方法，其特征在于，高效复合生物肥料的重量份数组成为黑曲霉培养物40份、解磷巨大芽抱杆菌8份、枯草芽孢杆菌菌剂20份。 

5.根据权利要求1所述高效复合生物肥料的制备方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌剂制备方法如下： 

从斜面转接培养枯草芽孢杆菌，逐级扩培后的种子液转接入发酵罐中，发酵完毕发酵液经低温负压真空浓缩到原体积的40-50%，得到菌浓缩液；添加载体：向浓缩液中添加混合好的载体，混合均匀；浓缩液与载体的重量比为0.5-0.7:1，载体组成为：CaCO₃20-40份，糊精10-20份；流化床干燥，干燥温度50℃。 

6.根据权利要求5所述高效复合生物肥料的制备方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌发酵液采用斜面菌种逐级扩培获得，步骤如下： 

（1）一级种子培养：将枯草芽孢杆菌斜面菌种接入500毫升摇瓶中，培养基装量100毫升，旋转式摇床180转/分，培养温度30℃，培养时间24小时； 

（2）二级种子培养：将一级种子按照10%的接种量接入500毫升二级种子摇瓶中，培养条件与一级种子相同； 

（3）三级种子培养：将二级种子以10%接种量接入5000毫升三级种子摇瓶中，培养基装量1000毫升，旋转式摇床100转/分，培养温度30℃，培养时间24小时； 

（4）一级种子罐培养：将三级种子以10%接种量接入总容积为150L的一级种子罐，发酵培养基装量100L，培养温度28℃，搅拌速度100转/分，通风量（V/V）1:0.5,罐压0.05Mpa,培养时间24小时； 

（5）发酵培养：将一级种子罐菌种以10%接种量接入总容积为1.5吨二级种子罐，发酵培养基装量1吨，培养条件培养温度28℃，搅拌速度100转/分，通风量（V/V）1:0.5,罐压0.05Mpa,培养时间24小时。 

7.根据权利要求5所述高效复合生物肥料的制备方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌培养基组成为：葡萄糖6%,酵母提取物1%,蛋白胨0.2%，CaCO₃1%,pH6.8。 

8.根据权利要求1所述高效复合生物肥料的制备方法，其特征在于，黑曲霉培养物制备方法如下：菌种培养，采用常见固体发酵培养方法：孢子液接种到固态发酵培养料中，26-35℃培养至菌丝长满培养料，低温流化床干燥，粉碎干燥物。 

9.根据权利要求8所述高效复合生物肥料的制备方法，其特征在于，黑曲霉培养物制备方法如下： 

斜面菌种活化培养：将黑曲霉斜面菌种转接到斜面培养基上，27℃培养3天； 

固体一级种子培养：挑取黑曲霉斜面菌种接入装有100克培养基的500毫升三角瓶中进行种子培养，30℃培养3天即可； 

固体二级种子培养：将上述培养好的固体一级种子搅拌为碎块后加入装有1000克培养基的5000毫升三角瓶中进行种子培养，培养条件：30℃培养3天即可； 

固体发酵培养：将二级摇瓶种子粉碎，加入装有灭菌培养基的发酵池或托盘中混合均匀后培养，曲料培养温度控制在26-35℃，湿度80-90%，每隔10小时翻料一次，培养时间5-7天；固体曲料的培养采用常用曲料培养技术；待培养料长满菌丝即可结束培养，培养基预先经高温蒸煮灭菌处理，灭菌条件控制温度121℃，时间1小时； 

干燥粉碎：发酵结束培养料在流化床或其他干燥设备上进行干燥，干燥温度控制在60℃，干燥到水分含量在10%以下，然后将固体培养料进行粉碎，物料粉碎孔径在60目以上。 

10.根据权利要求8所述高效复合生物肥料的制备方法，其特征在于，黑曲霉培养基组成为：固体原料添加等量自来水；初始pH自然；所述固体原料质量百分比组成为：麸皮70%,粉碎的作物秸秆15%,豆饼粉5%,玉米淀粉10%。