[发明专利]一种乌鸡白凤片中有效成分的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医疗领域，尤其是涉及中药有效成分的检测方法。

背景技术

乌鸡白凤片由乌鸡、人参、白芍、丹参、当归等二十味中药组成，具有补气养血、调经止带的功效，主治气血两亏引起的身体瘦弱，腰酸腿软，阴虚盗汗，经血不调，子宫虚寒，行经腹痛，崩漏带下，产后失血等症。研究表明，乌鸡白凤片可降低大鼠甘油三酯及氧化低密度脂蛋白、阻止动脉硬化有防治骨质酥松，保护肝脏等作用，对阿尔茨海默病具有潜在的药用价值。因此，乌鸡白凤片的临床应用越来越广，目前国内生产的厂家也越来越多。为了控制乌鸡白凤片质量，2005年药典也有含量测定方法和标准，也有文献报告乌鸡白凤中丹参酮、丹参素或芍药苷含量测定的方法。由于乌鸡白凤片是由20味药材制备而成，有效成分复杂多样性，现有技术含量都是测定其中一种成分，至今为止，还没有同时测定多种成分的检测方法出现，尤其是一种同时对芍药苷和甘草苷定量定性的检测方法。因此，为全面提高其产品质量，一种方法可以检测多种成分并操作简单，易于产业化日常检验的质量测定方法是迫在眉睫的。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种乌鸡白凤片有效成分的检测方法，该方法专属性强，灵敏度高，准确可靠，操作简单并适应产业化的日常检验。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种乌鸡白凤片有效成分检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)芍药苷、甘草苷定量测定方法；

(2)芍药苷、甘草苷、香附定性检测方法：

上述步骤(1)中所述的芍药苷、甘草苷用高效液相色谱法同时测定含量，包括步骤为：a、对照品制备；b、供试品制备；c、高效液相色谱法；

上述步骤(2)中所述芍药苷、甘草苷采用薄层色谱法同时检测，香附采用薄层色谱法单独检测。

上述步骤(1)中所述的芍药苷、甘草苷含量测定方法，包括如下步骤：

(a)对照品制备：分别取芍药苷、甘草苷对照品用50-95％乙醇或甲醇或流动相溶解，即得；

(b)供试品制备：取乌鸡白凤片样品，用50-95％乙醇或甲醇或流动相提取，即得。

(c)高效液相色谱法：色谱条件如下

色谱柱C185u250*4.6mm、流动相：乙腈-甲醇-酸溶液、波长：235nm、流速：1.0-1.5ml／min。

上述步骤a中优选芍药苷对照品浓度是甘草苷对照品溶度3-5倍，优选芍药苷对照品浓度为19-20ug／ml，甘草苷对照品溶度为4-6ug／ml。

上述步骤b中，优选样品中70％乙醇超声提取30-60min，放冷，称重，再用70％乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

上述步骤a、c所述流动相为乙腈-甲醇-酸10-15：3-8：75-87。优选为乙腈-甲醇-酸13∶5∶82。所述流动相中酸为醋酸、磷酸或甲酸，浓度为0.05-0.12％，优选为醋酸，浓度为0.1％。此处酸浓度是经过大量试验筛选出的结果，酸浓度过高PH值低，对色谱柱损伤较大，酸浓度过低则分离不完全。

本发明上述步骤(2)中香附的薄层检测方法如下，

a、供试品溶液制备：取乌鸡白凤片样品，照挥发油测定法，在挥发油测定器中用乙酸乙酯：水=1∶150提取蒸馏2-5小时，取乙酸乙酯层作为供试品溶液；

b、对照品溶液的制备：取α-香附酮对照品，加乙酸乙酯溶解，即得对照品

溶液；

c、照薄层色谱法：取对照品和供试品溶液，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯=8-10∶1-2为展开剂，展开，取出，晾干后，置于紫外灯下检视，后喷以二硝基苯肼试液显色，斑点橙红色。

上述步骤a中供试品制备：所述挥发油测定器中加入300ml水，然后再加入乙酸乙酯2ml，富集挥发油，取乙酸乙酯层即可。

上述步骤c中展开剂甲苯-乙酸乙酯9.5∶1.5。

本发明步骤(2)中芍药苷和甘草苷的定性检测方法，步骤如下

a、供试品溶液制备：取本品加甲醇提取，滤过，残渣加水溶解，正丁醇萃取，取正丁醇液蒸干，残渣甲醇溶解即得；

b、取甘草苷对照品，加甲醇溶解，作为甘草苷对照品溶液；甘草对照药材溶液的制备：取甘草对照药材，按照步骤a供试品溶液制备方法制备，作为甘草对照药材溶液；