[发明专利]EV71 VP1和RdRp蛋白特异性T细胞表位肽及其应用

权利要求书

1.EV71 VP1和RdRp蛋白特异性T细胞表位肽，其氨基酸序列为下列SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.24：

SEQ ID NO.1：FVSTIRSVPIGRALAIPN；

SEQ ID NO.2：ELKMVAYGDDVLASYPFP；

SEQ ID NO.3：ELRSLDKIRKGKSRLIEA；

SEQ ID NO.4：LEPSVFHDVFEGNKEPAV；

SEQ ID NO.5：PIGRALAIPNFENLRRNW；

SEQ ID NO.6：PNFENLRRNWLELF；

SEQ ID NO.7：VFEGNKEPAVLTSKDPRL；

SEQ ID NO.8：PYSTYVKDELRSLDKIRK；

SEQ ID NO.9：AVGCNPDVFWSKLPILLP；

SEQ ID NO.10：MDKYGLDLPYSTYVKDEL；

SEQ ID NO.11：LELVLREIGYSEEAVSLI；

SEQ ID NO.12：GYSEEAVSLIEGINHTHH；

SEQ ID NO.13：NPGTVTGSAVGCNPDVFW；

SEQ ID NO.14：YVTQAALHYANQLKQLDI；

SEQ ID NO.15：HLYEVFHANPGTVTGSAV；

SEQ ID NO.16：DINTSKMSMEEACYGTEY；

SEQ ID NO.17：PSVFVKLSDPPAQVSVPF；

SEQ ID NO.18：LAWQTATNPSVFVKLSDP；

SEQ ID NO.19：PFMSPASAYQWFYDGYPT；

SEQ ID NO.20：FSVRTVGSSKSKYPLVIR；

SEQ ID NO.21：HVRAWIPRPMRNQNYLFK；

SEQ ID NO.22：EKDLEYGACPNNMMGTFS；

SEQ ID NO.23：EVVPQLLQYMFVPPGAPK；

SEQ ID NO.24：PMRNQNYLFKSNPNYAGD。

2.EV71 VP1和RdRp蛋白特异性T细胞表位肽的医疗用途。

3.EV71 VP1和RdRp蛋白特异性T细胞表位肽的制备方法，结合EV71-湖北-09-中国病毒株(基因号：GU434678.1)EV71 C4亚型VP1和RdRp蛋白氨基酸基因序列，合成覆盖VP1蛋白36条和RdRp蛋白57条重叠肽段，利用重叠肽段合成技术(PEPscreen；Sigma-Aldrich)合成VP1和RdRp蛋白区重叠肽段，VP1蛋白区包含有297个氨基酸，RdRp蛋白区包含462个氨基酸，每条肽段由18个氨基酸组成，相邻肽段间重叠10个氨基酸，重叠肽段纯度＞95％、溶解在RPMI1640，浓度为20mg／ml，-80℃液氮保存；采用体外IFN-γElispot法，检测覆盖EV71 VP1和RdRp蛋白序列重叠肽段作为抗原，诱导EV71感染血T细胞、CD4+和CD8+T细胞免疫反应，筛选VP1和RdRp蛋白区特异性T细胞表位24条；T细胞表位肽采用Elispot技术检测PBMC分泌IFN-γ水平而获得筛选鉴定；CD4+T细胞表位肽采用阴性磁珠分选法(MACS)去除CD8+T或CD4+T细胞后，再采用Elispot技术检测PBMC分泌IFN-γ水平而获得筛选鉴定；PBMC应用Ficoll密度梯度离心法获得，Elispot筛选能够刺激EV71感染患者PBMC产生特异性T细胞免疫应答的EV71 VP1和RdRp阳性多肽。

4.EV71 VP1和RdRp蛋白特异性T细胞表位肽诱导CD4+T细胞产生的免疫蛋白和利用其的疫苗。