[发明专利]一种促胰岛细胞增殖培养液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物领域，特别涉及一种促胰岛细胞增殖的培养液及其制备方法。

背景技术

糖尿病是一种由胰岛素分泌不足导致的慢性代谢疾病，尤其是血糖水平的异常，晚期可导致肾脏、眼底、周围神经系统和血管等组织器官的病变，并伴有失明、肾衰等严重症状的罹患风险。据估计目前全球有超过1.5亿人患有糖尿病，而预计在2025年糖尿病患者将达到3亿。

目前糖尿病主要可分为两种类型：一型糖尿病和二型糖尿病。前者主要是由胰岛素的绝对不足引起的，而胰岛素绝对量的不足则是由于人体中唯一可以分泌胰岛素的细胞——胰岛β细胞的严重不足。目前研究表明，胰岛β细胞缺失的主要原因是T细胞对β细胞的自体免疫攻击。二型糖尿病则的主要病因则是胰岛素的靶器官(肝脏、肌肉等)对胰岛不敏感，而更深层的病因较一型糖尿病更为复杂。二型糖尿病在初期只表现为胰岛素的相对缺乏，并伴随有应激性的胰岛增殖和高胰岛素表现，而在晚期由于长期高血糖导致的胰岛β细胞的大量凋亡，胰岛素水平也大量下降。因此，针对一型和二型糖尿病，胰腺或胰岛移植都是最理想的治疗方案之一。

胰腺器官移植较胰岛移植开展得早，相对而言能提供更长时间的正常胰岛素供给，但是胰腺器官移植手术难度高，风险大，作为糖尿病的治疗手段并不十分理想。目前，供体胰岛的移植是治疗糖尿病的最有效手段，胰岛细胞按其染色和形态学特点，主要分为α细胞、β细胞、γ细胞及PP细胞，α细胞约占胰岛细胞的20%，分泌胰高血糖素（glucagon）；β细胞占胰岛细胞的60%-70%，分泌胰岛素(insulin)；γ细胞占胰岛细胞的10%，分泌“生长抑素”；PP细胞数量很少，分泌胰多肽(pancreatic polyeptide)，其中，胰岛β细胞分泌胰岛素，起调节血糖含量的作用。

目前，临床获得的胰岛来源非常有限，需要在体外将供体来源的少量胰岛充分扩展和增殖。然而，目前采用常用细胞培养基培养胰岛细胞的方式，难以快速、有效的扩增得到大量胰岛细胞。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种促胰岛细胞增殖的培养液以及8种化合物在制备促胰岛细胞增殖的培养液中的用途。

本发明促胰岛细胞增殖培养液，它以常用细胞培养基为基础培养基，添加有如下任意一种或者多种化合物：

化合物1：1-（3-（3-氨基-6-甲酰氨基-2-苯基）吡啶-4-哌啶-4-羧酸；

化合物2：1-（3-（3-氨基-6-甲酰氨基-2-苯基）吡啶-4-哌啶-3-羧酸；

化合物3：6-((2-((4-(2,4-二氯苯基)-5-(4-甲基-1H-咪唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)乙基)氨基)尼古丁腈；

化合物4：N-(5-甲基-1氢-吡唑-3-基)-2-苯基喹唑啉-4-胺；

化合物5：3-氨基-N-(4-(4-氨基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-苯基吡嗪-2-甲酰胺；

化合物6：3-氨基-N-(4-((二甲)甲基)吡啶-3-基)-6-苯基-2-甲酰胺基；

化合物7：1-(4-甲氧基苄基)-3-(5-硝基噻唑-2-基)尿素；

化合物8：N-(3-异丙氧基丙基)-4-(4-甲基苯甲酰胺)-1氢-吡唑-3-甲酰胺。

常用细胞培养基，是指包含供给细胞营养和促使细胞增殖的基础物质的培养基，如，RPMI-1640培养基（即1640培养基），最低必须培养基（Minimum Essential Medium，MEM）、DMEM-高糖培养基、DMEM-低糖培养基、DMEM/F12培养基、M-199培养基等等。

所述的培养液添加的化合物的终浓度不低于10nM。优选地，所述化合物的终浓度不低于100nM。进一步优选地，所述化合物的终浓度为100nM～100μM。

所述常用细胞培养基是1640培养基、最低必须培养基、DMEM-高糖培养基、DMEM-低糖培养基、DMEM/F12培养基或M-199培养基。

所述培养液中还添加有胰岛素样生长因子、上皮生长因子、青霉素、链霉素、巯基乙醇、葡萄糖或胎牛血清。优选地，所述培养液中含有胰岛素样生长因子和上皮生长因子，其中，胰岛素样生长因子的终浓度为10ng/ml，上皮生长因子的终浓度为10ng/ml。

所述胰岛细胞为胰岛β细胞。胰岛β细胞又叫胰岛B细胞。

本发明前述培养液的制备方法，步骤如下：按照前述配比取原料，混匀，即可。

如下化合物1～8中任意一种或者多种在制备促进胰岛细胞增殖的培养液中的用途：