[发明专利]一种新的重组人生长激素粗提中的提取方法有效
| 申请号： | 201310750286.0 | 申请日： | 2013-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN103724425A | 公开（公告）日： | 2014-04-16 |
| 发明（设计）人： | 李庆春;钱好;张军;杜研;鞠蒙蒙 | 申请（专利权）人： | 长春圣金诺生物制药有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/61 | 分类号： | C07K14/61;C07K1/14 |
| 代理公司： | 吉林省长春市新时代专利商标代理有限公司 22204 | 代理人： | 孙国振 |
| 地址： | 130103 吉林省*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 人生 激素 中的 提取 方法 | ||
1.一种新的重组人生长激素粗提中的提取方法，其特征是：包括以下步骤：
（1）制备破菌缓冲体系：配制20mM磷酸盐缓冲液（PB）,盐酸调节pH至7.5-8.0，缓冲液成分为：磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、EDTA、纯化水，用量比列是5.732g:0.624g:0.292g：1000ml；
（2）菌体称定：等量称量2份TPS-Hgh工程菌菌体备用；
（3）菌体裂解：将步骤（2）所取菌体和步骤（1）制备的缓冲液按菌体：缓冲体系为1:6，放在磁力搅拌器上裂解1h至菌体完全溶解；
（4）裂解液离心：将步骤（3）所得裂解液等量称量后，对称放入离心机转子腔内，在转数6900rpm/min，温度4-8℃条件下离心30min，收集离心上清液；
（5）上清液盐析：在步骤（4）所得上清液中加入梯度硫酸铵，硫酸铵和上清液的体积比是243g、277g、313g、351g、390g、430g、472g/1000ml和氯化钠和上清蛋白盐析液的体积比分别是233g、263g、292g、321g、351g/1000ml，用玻璃棒搅拌至完全溶解，盐析30min，再次离心，参数同上。收集离心沉淀；
（6）沉淀溶解：将步骤（5）得到的离心沉淀使用20mMPB裂解缓冲液溶解，溶解后对称放入离心机转子腔内，在转数6900rpm/min，温度4-8℃条件下离心30min，得含蛋白的上清液,完成粗提。
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