[发明专利]化学合成的HSV2病毒gE糖蛋白胞外区基因片段及其表达、应用

说明书

技术领域

本发明涉及的是化学合成的HSV2病毒gE糖蛋白胞外区的全新基因片段，利用基因工程技术，制备重组HSV2病毒gE糖蛋白。通过计算机分析，筛选出含强抗原表位的HSV2病毒的gE糖蛋白胞外区片段，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，利用基因工程技术表达，表达的蛋白可用于疫苗及HSV2病毒抗体或抗原的检测等，本发明涉及基因工程技术、疫苗和诊断试剂领域。

背景技术

单纯疱疹病毒（Herpers simplex virus, HSV）属于疱疹病毒科α亚科，是人类感染的常见病毒之一，根据血清型可分为I和II型两种。其中，I型主要通过口面部感染，也存在性传播，II型主要通过性传播，并且和女性宫颈癌的发生密切相关。近期越来越多的研究表明，HSV I对阿兹海默症的发生有关联，HIV的感染和HSV II也有联系。HSV在全球普遍流行，HSV I型在成人血清中阳性率高达85%以上，HSV II型全球血清阳性率约为20%，并且发病人数以每年25%速度增加。

HSV可在感染组织或附近部位繁殖形成原发病灶，并在三叉神经核脊神经建立终身的潜伏感染，当机体受到外界刺激或免疫力下降是，HSV病毒下行至表皮大量增殖，形成复发感染。HSV反复发作与HSV免疫逃逸相关，HSV通过躲避人体免疫系统的攻击实现潜伏感染和复发感染，因此HSV一旦感染，很难被清除，患者受到长期疾病折磨。

病毒糖蛋白 (glycoproteins, gp) 是病毒毒粒表面的抗原决定簇，目前已发现并正式命名的包膜糖蛋白共有12个(gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、gL和gM等)。gB和gD糖蛋白参与病毒与宿主细胞的吸附和融合，已被选作候选疫苗，对其研究较多。近年研究发现，gE2是免疫逃逸相关的包膜糖蛋白。HSV病毒包膜蛋白gE与IgG Fc端结合，从而阻断多个补体介导的免疫途径，使HSV病毒成功躲避机体的免疫系统攻击。因此他是造成病毒潜伏感染的蛋白分子之一。选取gE糖蛋白用于免疫机体，阻断病毒的潜伏感染，有希望成为理想的候选疫苗。

本发明通过计算机分析，筛选出含强抗原表位的HSV2病毒的gE糖蛋白胞外区片段，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，利用基因工程技术表达，表达产物具有较好的抗原性和特异性，表达的蛋白可用于疫苗及HSV2病毒抗体或抗原的检测等。

发明内容

本发明是化学合成的HSV2病毒gE糖蛋白胞外区的全新基因片段，利用基因工程技术，制备重组HSV2病毒gE糖蛋白胞外区片段。通过计算机分析，筛选出含强抗原表位的HSV2病毒gE糖蛋白胞外区片段,第21个氨基酸 — 第414个 氨基酸，共394个氨基酸，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，利用基因工程技术表达该基因。表达的蛋白可用于疫苗、HSV2病毒抗体或抗原的检测及用于免疫制备抗HSV2病毒单抗和多抗等。

本发明通过计算机分析，筛选出含强抗原表位的HSV2病毒的gE糖蛋白胞外区片段，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，利用基因工程技术表达，表达产物具有较好的抗原性和特异性，表达的蛋白可用于疫苗及HSV2病毒抗体或抗原的检测等。

化学合成的HSV2病毒gE糖蛋白胞外区基因片段及其表达、应用是采取以下步骤实现的：

1．HSV2病毒gE糖蛋白胞外区抗原表位的筛选及其基因片段的化学合成：

利用ANTHEWIN等软件，通过计算机分析HSV2病毒gE糖蛋白的氨基酸序列， 发现gE糖蛋白的N端（第21氨基酸 — 第414 氨基酸）含有较强的抗原决定簇。选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，并且在5'端增加了EcoRI酶切位点(下划线部分)、起始密码子（ATG）、信号肽（GGCTGGAGCTGTATTATCCTGTTCCTGGTCGCCACTGCCACTGGAGTTCATTCTGCC），在3'端增加了His标记（CAC CAC CAC CAC CAC CAC）、终止密码子（TGA）和Himd III酶切位点(下划线部分)，使该基因片段易于克隆至质粒pMCE5内的EcoRI和Himd III酶切位点内。

筛选的HSV2病毒gE糖蛋白内的抗原表位氨基酸序列（第21个aa － 第414个aa）：