[发明专利]一种处理石油类污染物的固定化菌藻共生系统及其应用

权利要求书

1.一种处理石油类污染物的固定化菌藻共生系统，其特征在于其是由如下方法制备而成：

（1）藻种的选择及无菌化培养：小球藻藻液先经过溶菌酶和SDS无菌预处理，然后接种至含抗生素的BG11培养液中进行无菌化培养，得到无菌的小球藻藻液备用； 

（2）石油降解菌的选择和培养：取6种石油降解菌，购买于中国海洋微生物菌种保藏管理中心（MCCC），其中假单胞菌属3种，菌株编号为1A00241、1A00269 和1A00364，芽孢杆菌属2种，菌株编号为1A0008、1A0009，无色杆菌属1种，菌株编号为1A04524，对上述6种石油降解菌依次命名为Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6，并分别进行培养，培养时间为3~5天；

（3）复合载体菌藻凝胶球的制备：将步骤（1）得到的无菌的小球藻藻液和步骤（2）得到的石油降解菌采用海藻酸钠和PVA作为固定化载体进行固定化，最后得到固定化菌藻共生系统。

2.根据权利要求1所述的固定化菌藻共生系统，其特征在于：步骤（1）所用无菌预处理方法为：取在BG11培养液中培养7d的小球藻藻液，离心去上清液，无菌蒸馏水重复洗涤离心3~5次，加1mL 0.005%的Tween80，5滴0.1mol/L的 EDTA，30mL无菌水，摇匀放置10min，再加1mL 0.5mg/ml溶菌酶，5滴0.25% 的SDS，摇匀，放置10min，离心去上清液后，再用无菌水洗涤3~5次。

3.根据权利要求1所述的固定化菌藻共生系统，其特征在于：步骤（1）中含抗生素的BG11培养液配方为：NaNO₃ 1.5g/L、K₂HPO₄ ?? 3H₂O 0.04 g/L、MgSO₄?? 7H₂O 0.075 g/L、CaCl₂?? 7H₂O 0.036 g/L、柠檬酸0.006 g/L、柠檬酸铁铵0.006 g/L、EDTA 0.001 g/L、Na₂CO₃ 0.02 g/L、H₃BO₃ 6.1×10-5 g/L、MnSO4?? H₂O 1.69×10-4 g/L、ZnSO4?? 7H₂O 2.87×10-4 g/L、CuSO4?? 5H₂O 2.5×10-6 g/L、(NH₄)₆Mo₇O₂₄?? 4H2O 1.25×10-5 g/L、1ml/L青霉素和0.5ml/L卡拉霉素。

4.根据权利要求1所述的固定化菌藻共生系统，其特征在于：步骤（1）培养条件为：温度25±1 ℃，摇床转速150r/min培养，光照强度为8000lux，光暗比L/D=14：10。

5.根据权利要求1所述的固定化菌藻共生系统，其特征在于：步骤（2）所用石油降解菌的培养基配方为：石油10 g、NH₄NO₃ 3 g、KH₂PO₄ 0.5 g、K₂HPO₄ 0.5 g、微量元素液2 mL和水1000 mL，pH为7.5；微量元素液组分（重量）为：MgSO₄ 0.4%、CuSO₄ 0.1%、MnSO₄ 0.1%、FeSO₄ ??H₂O 0.1%和CaCl₂ 0.1%。

6.根据权利要求1所述的固定化菌藻共生系统，其特征在于：固定化方法具体为：用无菌注射器抽取含藻种、石油降解菌群和固定化复合载体的混合溶液至质量浓度4%、pH=6.7的硼酸溶液中，在10℃固定化交联20h，然后将小球取出，去离子水脱盐2h，并4℃保存于无菌海水中，得到固定化菌藻共生系统。

7.根据权利要求1所述的固定化菌藻共生系统，其特征在于：步骤（2）小球藻藻液、石油降解菌培养液与固定化载体的比例为1:1:2混合，固定化载体的配方（质量分数）为0.3%海藻酸钠、20%PVA、8%SiO₂和0.6%CaCO₃。

8.一种权利要求1所述的固定化菌藻共生系统在石油污染物降解中的应用。