[发明专利]稀有密码子改造的人ZNF580基因及该基因原核表达的蛋白及多克隆抗体

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，特别是涉及一种改造的基因及其表达和应用。

背景技术

动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是严重危害人类健康的常见病，是缺血性心脑血管疾病的重要病理基础。AS斑块的主要特征是病灶中细胞内及细胞外脂质聚集、单核/巨噬细胞浸润、泡沫细胞形成、主动脉平滑肌增生以及结缔组织成分聚集。近些年来，随着人们生活方式和饮食结构的变化，AS所致的心脑血管疾病发病率在我国有上升趋势。AS是一种环境因素与遗传因素所诱发的多基因病，目前还缺少十分有效的治疗措施。应用分子生物学技术对心脑血管疾病患者和动物模型的大量研究，已经克隆出100多个AS相关基因，例如apoAI、apoB、apoCI、apoCⅡ、apoCⅢ、LPL、LCAT、CEPT、ABBP-1、Ath-1、Ath-2、Ath-6等等，并利用转基因及基因敲除动物证实它们的生理功能。然而，AS作为一种复杂的多基因病，牵涉到一个庞大的基因调控网络，其发病机制至今尚未完全阐明，随着人类及各种模式生物基因组序列测序的完成，未来一个重要的目标是阐明人体约3.5万个基因的功能。为了有效防治AS，有必要深入研究与AS相关基因的功能。血浆低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL）水平持续升高与动脉粥样硬化的发病率呈正相关，血管内皮细胞是AS形成及发展的始动环节。张文成等人以致动脉粥样硬化因素LDL诱导人脐静脉内皮细胞系ECV304，采用差异显示逆转录PCR技术进行分析，以差异表达的新ESTs为探针，筛选人主动脉cDNA文库，得到一个全长为1726bp的新基因cDNA全长（Genbank注册号：AF184939），该基因由人类基因命名委员会定名为ZNF580，ZNF580基因用SEQ ID NO.3所示。ZNF580基因cDNA748-1266位碱基序列构成一个完整的开放阅读框架，该cDNA开放阅读框全长为519bp，编码172个氨基酸组成的蛋白质，分子量约为18.7564kDa。经分子生物学网站进行蛋白质的功能基序分析：其氨基端5-88位氨基酸序列为脯氨酸富含域，羧基端94-172位氨基酸序列中含有三个串联重复的C2H2型锌指蛋白结构域，三个锌指符合C2H2型锌指蛋白基序CX2CX3FX5LX2HX3H（其中X代表保守性差的氨基酸）。多组织Northern杂交证实ZNF580基因在人多种组织中均有表达，其中在心肌、肾脏、胰腺组织中的表达量最高，大脑表达次之，在胎盘、肝脏、骨骼肌、肺组织中表达量较低。LDL诱导内皮细胞使ZNF580基因表达明显下调。ZNF580基因定位于人19号染色体19q13.42。将ZNF580编码区克隆到真核表达载体pEGFP-C1上，转染人胚肾上皮细胞系HEK293、胃癌细胞系MGC803进行瞬时表达，融合有绿色荧光蛋白EGFP的目的蛋白定位于细胞核。前期研究工作表明：ZNF580基因编码一种与AS相关的具有调控作用的C2H2型锌指核蛋白转录因子。检索基因表达数据库中有关ZNF580的相关信息显示，ZNF580受多条信号通路的调控，并通过调节靶基因的开关或转录水平参与细胞增殖、分化与凋亡等过程。为了深入研究ZNF580蛋白在基因表达调控及信号转导中的作用，有必要利用基因工程技术表达并纯化ZNF580蛋白，制备多克隆抗体，从而为研究ZNF580基因的功能奠定基础。

经过研究发现，完全按照人ZNF580基因开放阅读框序列进行基因工程操作，人ZNF580蛋白在原核中表达不出来。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的人ZNF580基因不能进行原核表达的不足，提供一种能在原核中表达的稀有密码子改造的人ZNF580基因。

本发明的第二个目的是提供用稀有密码子改造的人ZNF580基因进行原核表达产生的ZNF580蛋白。

本发明的第三个目的是提供用ZNF580蛋白制备的多克隆抗体。

本发明的技术方案概述如下：

稀有密码子改造的人ZNF580基因，是SEQ ID No.1所示。

用SEQ ID No.1所示基因进行原核表达产生的ZNF580蛋白，所述ZNF580蛋白氨基酸序列由SEQ ID No.2所示，分子量约为18.7564kDa，等电点为10.13。

用ZNF580蛋白制备的多克隆抗体。

本发明的优点：