[发明专利]一种参芪扶正注射液核磁共振质量控制方法

说明书

技术领域

本发明涉及参芪扶正注射液的质量控制方法，特别涉及采用质子核磁共振指纹图谱结合多成分含量测定的方法来控制参芪扶正注射液中氨基酸、有机酸和糖类的质量。 

背景技术

参芪扶正注射液是丽珠集团利民制药厂研制开发成功的国家二类中药新药参芪扶正注射液，该药为国内首创的纯中药澄明大输液，1999年11月获国家药品监督管理局正式生产批文。参芪扶正注射是由传统补气药党参、黄芪组成的复方制剂，具有益气扶正之功效，用于肺脾气虚引起的神疲乏力，少气懒言，自汗眩晕；肺癌、胃癌见上述症候者的辅助治疗。 

在2009年1月28日公开的200710136382.0号中国专利申请中报道了有关参芪扶正注射液的质量控制方法，按照该专利公开中记载的方法，建立起了参芪扶正注射液的HPLC指纹图谱。该专利申请公开中记载的方法据尽管有许多优点，但仍存在不足，采用高效液相色谱法(HPLC)分析方法对天然产物进行研究，需要经过提取、精制等预处理，操作较烦琐，且效率低。而且ODS色谱柱在分离过程中，性较大的水溶性成分损失被。因此，HPLC指纹图谱技术不能检测到参芪扶正注射液中的氨基酸、有机酸和糖类化合物。 

近年来由于现代超导高磁场的脉冲Fourier变换核磁共振谱仪的应用，核磁共振技术应用于天然产物分析已日趋成熟。核磁共振定量分析法操作简便，样品用量少，定性鉴定和定量分析同步完成，无须被测物的标准对照品，只须一般标准品(内标)即可完成定量分析，分析速度和精密度可以接近HPLC法。 

所以，本发明采用定性、定量的质子核磁共振指纹图谱技术，建立一种针对参芪扶正注射液中氨基酸、有机酸和糖类化合物的质量控制方法，在工业生产中可与HPLC指纹图谱联合使用，实现对参芪扶正注射液产品的全面质量控制。 

发明内容

本发明提供了一种参芪扶正注射液的¹H-NMR指纹图谱质量控制方法，可以有效解决参芪扶正注射液中氨基酸、有机酸和糖类化合物的含量测定问题，为参芪扶正注射液全面质量控制奠定基础。 

本发明是通过下列步骤实现的： 

(1)参芪扶正注射液¹H-NMR指纹图谱的建立和定性鉴别 

①参芪扶正注射液样品溶液的制备 

参芪扶正注射液样品冻干后精密称取10mg，加入0.6ml D₂O(含内标TSP0.001g／ml)，转移至5mm核磁管中，加封直接用于¹H-NMR测试。 

②¹H-NMR指纹图谱的测定 

将核磁管置于核磁共振仪中，采用水峰抑制脉冲序列测定参芪扶正注射液样品溶液的 ¹H-NMR指纹图谱和对照品溶液的¹H-NMR图谱。 

优化的测试参数及条件为：抑水峰序列zgcppr，观测频率600.23MHz，测定温度298K，谱宽7211.5Hz，90°脉冲宽度13.87μs，采样数据点65536，扫描次数16次，延迟时间2s，接受增益114。 

③质子信号峰的定性鉴别 

参芪扶正注射液对照品溶液的¹H-NMR图谱上质子信号峰分布在δ0-5.5之间，其中δ0.0-3.2是氨基酸和有机酸质子特征信号区，δ3.3-5.5是糖基质子特征信号区(图1)。根据质子信号峰的化学位移值和偶合裂分情况，结合参芪扶正注射液的二维核磁图谱信息和标准品溶液的¹H-NMR图谱，共鉴定出17个氨基酸类、有机酸类和糖类化合物，分别为： 

(2)参芪扶正注射液¹H-NMR多成分含量测定方法的建立和测定 

①参芪扶正注射液供试样品溶液的制备 

参芪扶正注射液样品冻干后精密称取10mg，加入0.6ml D₂O(含内标TSP0.001g／ml)，转移至5mm核磁管中，加封直接用于¹H-NMR测试。 

②参芪扶正注射液供试样品的¹H-NMR指纹图谱测定 

将核磁管置于核磁共振仪中，采用水峰抑制脉冲序列测定参芪扶正注射液样品溶液的 ¹H-NMR指纹图谱和对照品溶液的¹H-NMR图谱。