[实用新型]白血病融合基因的联合并行检测诊断试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种试剂盒，特别是涉及一种白血病融合基因的联合并行检测诊断试剂盒。

背景技术

白白血病是由于造血干细胞分化异常和恶性增生而引起的造血系统恶性肿瘤，是我国最常见的恶性肿瘤之一。随着白血病研究的不断进展，发现许多白血病患者具有特异性的染色体易位，导致新的融合基因产生，这些异常基因已成为不同类型白血病的分子生物学特异性标志。2000年WHO关于白血病分型的标准中更是将一些常见异常基因归纳为白血病基本诊断的标准。因此，在分子基因水平对白血病相关的融合基因进行检测，不仅可以为白血病诊断、分型、临床治疗选择和预后判断提供重要依据，同时也为白血病微小残留病变提供检测基础。

白血病中常见的融合基因有：慢性粒细胞白血病（CML）中的BCR-ABL（b2a2）、BCR-ABL（b3a2）；急性淋巴细胞性白血病（ALL）中的BCR-ABL（e1a2）、E2A-PBX1、TEL-AML1、MLL-AF4(e10/e4)；急性粒细胞白血病（AML）中的CBFB-MYH11(A type)、AML1-ETO；急性早幼粒细胞白血病（APL）中的PML-RARA(L form)、PML-RARA(S form)。

目前，白血病主要是依靠细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学等检测方法来进行诊断和检测分型。细胞形态学受主观因素影响，临床诊断的一致率仅为70%左右。核型分析和显带技术等细胞遗传学方法是在全基因组水平筛查染色体易位，容易漏检许多染色体的微小异常。免疫学方法具有较高的假阳性率和假阴性率，并且无法做到早期诊断。当前国内外广泛使用的分子生物学检测白血病融合基因的方法中，荧光原位杂交技术（FISH）只能进行定性检测、操作复杂；荧光定量PCR存在着检测通量的局限性，所以都还不能真正满足临床诊断检测的需要。传统的固相生物芯片（Biochip）技术存在着可重复性差、灵敏度不够好以及操作繁琐的突出弱点。因此临床上需要有一种检测方法，能够迅速、稳定、准确地对白血病的多种融合基因进行联合并行检测，液相芯片（xMAP）技术正是这样一种新型检测技术。

液相芯片又称液态芯片，能够对少量样本进行定性、定量检测，具有高通量、操作简便、重复性好、灵敏度高、线性范围宽等突出优点。该系统是由许多微球（Beads）为主要基质构成的，在微球的制造过程当中，掺入了两种不同的红色分类荧光，根据这两种荧光的比例不同，把球形基质分为100种，可以标记上100种不同的探针分子，能同时对一个样品中多达100种不同的目标分子进行检测。根据检测物的不同，微球表面可以共价结合各种各样的核酸检测探针，在杂交反应进行时再加上荧光标记。在同一反应体系中可以同时加入不同的检测微球，这样就可以利用少量的样本进行快速、高通量的检测。反应结束后，通过微流体技术将微球排成单列快速流经液相芯片检测仪，每个微球可同时被两束激光检测到，红色激光激发微球上的红色分类荧光，将各个不同的反应区分开来而定性；绿色激光则激发结合在待测样本上的荧光标记进行定量。当标记好的待测样本与特定微球上的探针结合在一起时，两束激光所激发的光均可被检测到。最后，通过计算机的高速数字信号处理器，可以自动统计分析得出特定微球上的平均荧光强度，从而确定检测物的种类和数量。

因此，可开发一种基于液相芯片技术的针对白血病的多种融合基因进行联合并行检测诊断试剂盒，以便在临床检测上得到更好的应用。

实用新型内容

本实用新型要解决的技术问题是提供一种白血病融合基因的联合并行检测诊断试剂盒。该试剂盒包含对BCR-ABL（b2a2）、BCR-ABL（b3a2）、BCR-ABL（e1a2）、E2A-PBX1、TEL-AML1、MLL-AF4(e10/e4)、CBFB-MYH11(A type)、AML1-ETO、PML-RARA(L form)、PML-RARA(S form)，10种融合基因联合并行检测，可以对慢性粒细胞白血病（CML）、急性淋巴细胞性白血病（ALL）、急性粒细胞白血病（AML）、急性早幼粒细胞白血病（APL）进行临床分型，同时对患者进行疗效观察、预后及微小残留疾病进行动态监测。

为解决上述技术问题，本实用新型的白血病融合基因的联合并行检测诊断试剂盒，包括：包装盒体、衬垫，所述衬垫上设有放置试剂瓶的容器孔，所述容器孔内放置有：

装有共价结合了针对白血病融合基因mRNA所设计的特异性探针的微球的第一试剂瓶；

装有结合了Abelson基因探针的微球的第二试剂瓶；

分别装有针对白血病融合基因mRNA所设计的上、下游引物的第三试剂瓶和第四试剂瓶；