[实用新型]一种H5亚型禽流感病毒抗体和新城疫病毒抗体的ELISA检测试剂盒

说明书

本实用新型属于禽类疫病检测技术领域，具体涉及一种能同时对H5亚型禽流感病毒抗体和新城疫病毒抗体进行批量检测的ELISA检测试剂盒，适用于动物疫病流行病的调查与检测。

禽流感和新城疫都是流行于禽类中的烈性传染病，严重威胁畜禽业的正常发展，养鸡场的禽类一旦感染这些疫病，将造成严重的经济损失。

禽流感（avian influenza，AI）是由禽流感病毒引起的一种主要流行于鸡群中的烈性传染病。其病毒分为不同的亚型，迄今已经发现16个HA亚型（H1―H16）的禽流感病毒，鸡、火鸡、鸭和鹌鹑等家禽及野鸟均可感染，发病情况轻重不一，有的急性死亡，有的无症状带毒，其中H5亚型的禽流感病毒能引发高致病性禽流感，其发病率和死亡率极高，是危害禽类的主要烈性传染病之一，OIE将其列为A类疫病。

新城疫（newcastle disease，ND）是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血和高度接触性传染病，其以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征，具有很高的发病率和病死率，是危害养禽业的主要传染病之一，OIE将其列为A类疫病。

由此可见，养殖场的禽类一旦感染到禽流感和新城疫的病毒，将会导致禽肉类市场供求关系混乱、禽产品出口受阻、政府财政负担加重和公众恐慌。因此，使用禽流感和新城疫的疫苗进行免疫注射，并对免疫效果进行检测以确定其是否产生相应的抗体保护具有非常重大的意义。

本实用新型目的在于提供一种能同时、批量、有效检测H5亚型禽流感病毒抗体和新城疫病毒抗体的ELISA检测试剂盒。

为了实现上述目的，本实用新型采用如下技术方案：

一种H5亚型禽流感病毒抗体和新城疫病毒抗体的ELISA检测试剂盒，该试剂盒有一个盒体，其中，所述盒体内设有抗原包被反应板、H5亚型禽流感抗体阳性对照血清、新城疫抗体阳性对照血清、H5亚型禽流感抗体阴性对照血清、新城疫抗体阴性对照血清、20×浓缩洗涤液、样品稀释液、酶标结合物、显色剂A、显色剂B和终止液。

具体的，所述抗原包被反应板的规格为96孔（96T），从左至右被均分为检测区I和检测区II两个区域，每个区域有48T，所述检测区I包被H5亚型禽流感病毒蛋白抗原，检测区II包被新城疫病毒蛋白抗原。

所述的酶标结合物为酶标记的抗鸡IgG。

上述的H5亚型禽流感病毒蛋白抗原和新城疫病毒蛋白抗原均为高纯度的原核表达蛋白，可按照本领域常规技术制备或购买市售产品均可。盒体内可分为抗原包被反应板和试剂反应体系两部分；抗原包被反应板可以用PS材质的酶标板制成，试剂反应体系的包装瓶可以是聚丙烯瓶。

本实用新型采用酶联免疫间接法，将H5亚型禽流感病毒蛋白抗原和新城疫病毒蛋白抗原分别包被到包被反应板对应的两个检测区域内，所包抗原可分别与待检测样品中的特异性抗体反应，形成抗原‑抗体复合物被吸附到固相包被反应板上，再加入酶标结合物（酶标记的抗鸡IgG），形成固相病毒抗原‑病毒抗体‑抗鸡抗体‑HRP免疫复合物。如果待检样品中含有相应的抗体，加入显色剂后即为酶催化显色，为阳性；反之为阴性。

本实用新型采用酶联免疫间接法，将H5亚型禽流感病毒蛋白抗原和新城疫病毒蛋白抗原分别包被到包被反应板对应的两个检测区域内，所包抗原可分别与待检测样品中的特异性抗体反应，形成抗原‑抗体复合物被吸附到固相包被反应板上，再加入酶标结合物（酶标记的抗鸡IgG），形成固相病毒抗原‑病毒抗体‑抗鸡抗体‑HRP免疫复合物。如果待检样品中含有相应的抗体，加入显色剂后即为酶催化显色，为阳性；反之为阴性。

本实用新型所述试剂盒通过对包被反应板的抗原包被浓度和酶标记结合物浓度的调整，使其能够产生特异性显色，从而进行H5亚型禽流感病毒抗体和新城疫病毒抗体的检测。该试剂盒能同时对H5亚型禽流感病毒抗体和新城疫病毒抗体进行批量检测，具有灵敏度高、特异性好、快速检测大批量样品等优点，可用于动物疫病流行病的检测与调查。

图1为本实用新型所述试剂盒的横切面剖视图，即盒体内设置的组成及位置示意图；图中，1为抗原包被反应板；4为1mL H5亚型禽流感抗体阳性对照血清；5为1mL新城疫抗体阳性对照血清；6为1mL H5亚型禽流感抗体阴性对照血清；7为1mL新城疫抗体阴性对照血清；8为50mL 20×浓缩洗涤液；9为11mL样品稀释液；10为11mL酶标结合物；11为6mL显色剂A；12为6mL显色剂B；13为6mL终止液；14为盒体；

图2为图1中的抗原包被反应板的结构示意图，图中，1为抗原包被反应板；2为检测区I；3为检测区II。