[实用新型]猪流行性乙型脑炎病毒快速检测试纸条

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种检测猪流行性乙型脑炎病毒的器具，特别是涉及一种快速检测猪流行性乙型脑炎病毒的胶体金试纸条。 

背景技术

日本流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE），简称乙脑，是由日本流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）感染引起的人、猪、马等多种动物中枢神经系统损害的一种蚊媒性人畜共患病，是最重要的虫媒病之一，对人类公共卫生危害巨大。该病主要分布于东亚和东南亚，我国是乙脑发病人数最多的国家，乙脑发病数占世界总发病数的80%以上。最近几年澳大利亚本土和美国的关岛地区也出现乙脑病例，说明该病的流行区域呈现不断扩大的趋势，该病的有效防控仍然面临严峻的挑战。 

JE的诊断主要有病毒分离培养、血清学和分子生物学检测等手段。病毒分离鉴定不但对临床诊断很有价值，对流行病学及病原学研究亦至关重要，但该方法检测过程周期长，约需1-2个月，同时细胞培养的操作技术要求高，因此局限性较强。血清学方法包括补体结合试验、血凝抑制试验、间接血凝试验、中和试验乳胶凝集试验、免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验等。这些方法都需要在实验室内由专业技术人员操作，主要用于血清样品的抗体检测，很难检测到JEV抗原。分子生物学方法主要包括RT-PCR技术、RT-LAMP、real-time PCR和基因芯片技术。这些方法可用于检测组织样本或细胞培养物中的JEV病毒。与病毒分离培养相似，分子生物学方法操作复杂、需要特殊仪器设备及专业技术人员。虽然血清学方法相对简便，但仍需要荧光显微镜、酶标仪和多种配套试剂，以及较复杂的试验操作步骤和实验室工作环境，不适合生产或现场的快速诊断需要，难以在生产基层或兽医临床上普遍推广。 

实用新型内容

本实用新型要解决的技术问题：提供一种简便、准确、结果直观、肉眼可判的快速检测猪JEV的试纸条，该试纸条检测的特异性强、灵敏度高、操作简便、结果显示快速，检测成本低廉。 

为解决上述技术问题，本实用新型采用的技术方案是： 

一种快速检测猪流行性乙型脑炎病毒JEV的试纸条，包括不吸水的支撑层、附着在支撑层上的吸附层，所述吸附层由样品吸附纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层及吸水层依次拼接而成，所述纤维素膜层上标记有羊抗或兔抗小鼠IgG的对照印迹，以及含有抗JEV抗体的检测印迹；所述抗JEV抗体为抗JEV的单克隆抗体或多克隆抗体，所述金标抗体纤维层上附着有与检测印迹对应的以胶体金标记的抗JEV的多克隆抗体或单克隆抗体。

所述纤维素膜层由硝酸纤维素膜、纯纤维素膜、羧化纤维素膜或聚偏二氟乙烯膜制成；所述样品吸附纤维层由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成。 

所述支撑层由不吸水的硬质塑胶片或硬纸条制成；所述吸水层用吸水纸制成；所述金标抗体纤维层由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成。 

在所述样品吸附纤维层、金标抗体纤维层及吸水层上敷设有保护膜，且在样品吸附纤维层与金标抗体纤维层交界处对应的保护膜上偏向样品吸附纤维层一侧0.3～0.7 cm处印制有样品标记线。其中检测印迹与对照印迹的排列组合为“‖”、“/ /”、“＋＋”、“┴┴”、“┬ ┬”、“├├”中的一种。 

本实用新型的有益效果是： 

（1）本实用新型根据ELISA的基本原理，用免疫层析方法检测JEV病毒，利用微孔滤膜的渗滤浓缩和毛细管作用，将抗原-抗体反应由ELISA的传统液相环境转到固相滤膜上快速进行，并采用胶体金印迹代替酶印迹，凭肉眼直接观察胶体金的显色状况，即时获得检测结果，因此比ELISA等血清学方法更为简便、快速。

（2）检测特异性强，敏感性高。该试纸条以胶体金印迹高亲和力的特异性单抗/多抗为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标对单抗/多抗特异性和亲和力（结合力）影响很小，且具有较高的印迹率。 

（3）操作简便，快速。使用本实用新型试纸条时无需附加任何其它仪器和试剂，只要将其测试端插入待检的澄清样品液中30秒左右，然后在5分钟左右即可判定检测结果。 

（4）结果显示直观、准确。试纸条以显示棕红色的检测印迹和对照印迹作为检测的阳性和阴性印迹，即在纤维素膜上显示两条棕红色印迹，表示病毒在被检测样品液中被检出，结果为阳性；在纤维素膜上只显示一条棕红色对照印迹C，表示病毒在被检测样品液中未检出，结果为阴性。结果判定直观、准确，简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判。