[实用新型]一种快速检测血清中猪附红细胞体抗原的胶体金试纸条

说明书

技术领域

本实用新型提供了一种胶体金试纸条，属于预防兽医学检验领域，具体涉及了一种快速检测血清中猪附红细胞体抗原的胶体金试纸条。 

背景技术

猪附红细胞体（Mycoplasma suis,M.suis）是一种寄生于猪的红细胞表面、血浆、组织液及脑脊髓液中的微生物，引起猪的贫血、黄疸、发热、母猪流产等症状。附红细胞体是1928年被Schilling和Dinger同时在啮齿类动物中发现；1932年Doyle等（1932）在印度报道了猪的附红细胞体病；1950年Splitter(1950)正式命名引起猪黄疸型贫血病的附红细胞体为猪附红细胞体；据报道发现附红细胞体对猪的感染率可达到90%（张守发等，2003）。迄今为止，该病遍布美、欧、亚、非等世界各地。上世纪八十年代在中国首次发现M.suis,近几年引起大规模的爆发流行，给养猪业造成了巨大的经济损失。长期以来，由于M.suis无法在体外进行长期连续培养（Nonaka N等，1996）以及M.suis本身的一些特殊性，在很大程度上限制了对M.suis的研究。国外学者在对感染M.suis的病猪进行M.suis抗原蛋白的分析中发现了8种抗原蛋白（Hoelzle L E等，2006），其中被命名为p40、p45、p70的3种确定为M.suis蛋白，而p40即为MSG1蛋白。Hoelzle对MSG1的研究表明，M.suis的致病机制是通过其表面的黏附蛋白（MSG1）黏附于红细胞表面来实现的；Hoelzle等将MSG1蛋白作为疫苗注入猪体内，结果引起了严重的免疫反应，但不能对机体产生有效地保护作用（Hoelzle K等，2009），因此，MSG1蛋白可以作为检测M.suis的首选抗原蛋白。 

目前，对M.suis的检测方法主要采用血液镜检、血清学、分子生物学的方法，而这些诊断方法在用于临床检测时均存在明显的缺点。血液镜检技术主要 以观察红细胞的形状作为诊断依据，具有很大的片面性；血清学中，均因M.suis缺乏可行的体外培养方式而受到限制，其中补体结合实验不适用于个体的检测（王国永等，2006），荧光抗体技术敏感性较差，分子生物学方法价格昂贵且检测所需时间较长。因此，使这些方法在使用中受到很大的限制，也未见有可用的装置或者其他的检测工具。 

发明内容

针对现有技术存在的诸多不足之处，本实用新型提供了一种胶体金试纸条，具体涉及了一种快速检测血清中猪附红细胞体抗原的胶体金试纸条，该试条包括检测层，在检测层上设置有一条包被猪附红细胞体MSG1抗原抗体的检测线和一条包被抗鼠抗体的控制线，采用这种结构的试纸条具有特异性强、灵敏度高、检测速度快、性能稳定等优点，且不需使用仪器设备，成本低廉，操作简便，能广泛应用于基层对于猪附红细胞体的检测。 

本实用新型所采用的具体技术方案是： 

一种快速检测血清中猪附红细胞体抗原的胶体金试纸条，包括底衬，底衬上自左向右分别设置有样品垫，释放垫，检测层和吸收垫，其中检测层中部自左向右分别设置有一条包被猪附红细胞体MSG1抗原抗体的检测线和一条包被抗鼠抗体的控制线，检测层左侧上表面粘贴有涂覆金标抗体的释放垫，右侧表面粘贴有吸收垫；释放垫左侧上表面粘贴有样品垫。 

其中，底衬选用聚乙烯纤维板；样品垫选用玻璃纤维；释放垫和吸收垫均选用玻璃纤维；检测层选用硝酸纤维素膜，均为市购获得。 

而检测线中所采用的猪附红细胞体MSG1抗原抗体为高纯度的抗猪附红细胞体的多克隆抗体；所采用的涂覆金标抗体的释放垫中有由胶体金颗粒标记的抗猪附红细胞体MSG1抗原的多克隆抗体，均可采用现有的多克隆抗体，这样如果 检测的血清样品中含有猪附红细胞体的话，金标抗体便会与猪附红细胞体结合，当抗体与抗原结合复合物流经检测线后，该抗原抗体结合复合物便会被高纯度的抗猪附红细胞体的多克隆抗体所捕获。 

本实用新型中检测层上的检测线和控制线可通过如下具体步骤设置： 

将包被浓度为0.1-2mg/ml的抗猪附红细胞体MSG1抗原的多克隆抗体按1ul/cm²的速度喷于检测层上作为检测线，将包被浓度为0.1-2mg/ml的抗鼠IgG的二抗按1ul/cm²的速度喷于检测线下方的检测层上作为控制线，喷涂后在37℃下干燥30-60min即可；