[实用新型]半定量检测4-氯苯氧乙酸的试纸条

说明书

技术领域

本实用新型属于免疫化学检测技术，具体来讲，是一种半定量检测4-氯苯氧乙酸（4-D）的试纸条，借助胶体金显色的免疫层析反应，以达到快速检测农产品、水、土壤中的4-氯苯氧乙酸农药残留的目的。

背景技术

4-氯苯氧乙酸是在生产上广泛使用的除草剂和植物生长调节剂，其在农产品、水和土壤中的残留危害不容忽视，如其在土壤、水中残留超标，易引起棉花、某些蔬菜，对人类的健康造成较大危害，据报道，4-氯苯氧乙酸具潜在的致癌性、致突变性，是一种内分泌干扰物质，对免疫系统和生育系统具不良影响，人体摄入吸收后对眼睛、皮肤也有刺激作用，反复接触后对肝、心脏有损坏作用，能引起惊厥等。鉴于此，有些国家和世界组织都在环境标准中对4-氯苯氧乙酸做出了严格的规定，世界卫生组织2003年8月颁布《饮用水水质指南》，规定饮用水中4-氯苯氧乙酸最大检出浓度30ug/l。我国2001年颁布的《饮用水水质卫生规范》的非常检出项目中，将4-氯苯氧乙酸的限制规定为0.03mg/l，对其检出量的常规检测分析只能是利用气象色谱（GC）和高效液相色谱（HPLC）等仪器在实验室操作，方法繁琐，分析速度慢，成本高，要求仪器化程度高。随着待检样品、特别是要求现场快速检测样品量和速递增加，传统的农药残留手段难以适应要求，因此，迫切需要开封和应用高效率农药残留分析技术。

通过大量资料检索，注意到：4-二氯苯氧乙酸完全抗原和抗体的制备，并将该人工免疫抗原免疫家兔制备多克隆抗体，在此基础上建立了间接酶联免疫吸附测定检测4-氯苯氧乙酸农药残留的技术。该技术较GC、HPLC有较大革新，使检测时间较短、成本大大较低，灵敏度提高，有利于在食品、土壤、水利环境中，4-氯苯氧乙酸农药残留的快速检测并推广应用，但其方法还存在操作还操作相对繁琐、需要重复多次洗涤，需借助酶标仪读数等，不能实现真正意义上的一步法快速测定。还有生物遗传器是一种以生物活性单位为敏感元件，结合化学，物理转换元件，对被分析物具有高度选择性的仪器，农药残留分析时灵敏度高，该法在即时检验领域可发挥很大作用，但因为该法仍需要一定的仪器设备条件，不易进一步降低检测成本。

胶体金免疫层析技术是近些年来发展起来的一种简单，快速免疫学检测方法，具灵敏、简单、快熟、无需设备和仪器、经济适用、具高度特异性和敏感性、结果直观可靠、试剂和样品用量极少、不需专业人员操作，易于推广使用，正可以满足这种需求。

发明内容

本实用新型的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种半定量检测4-氯苯氧乙酸（4-D）的试纸条，改变4-氯苯氧乙酸农药残留多步骤繁琐的问题，实现廉价、一步快速检测4-氯苯氧乙酸农药残留。

本实用新型解决上述技术问题所采用的技术方案是：半定量检测4-氯苯氧乙酸（4-D）的试纸条，其特征在于包括有样品垫，胶体金垫，PVC板，硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，PVC板上粘贴有硝酸纤维素膜，所述的硝酸纤维素膜上有检测区和对照区，检测区为检测线（T线），对照区为质控线（C线），硝酸纤维素膜的两端侧层叠粘贴有吸水垫和胶体金垫，胶体金垫上还层叠粘贴有样品垫。

按上述方案，所述的检测线（T线）4有四条。

按上述方案，所述的检测线（T线）从左至右依次为T1线、T2线、T3线、T4线，检测线（T线）中4-氯苯氧丁酸—BSA偶联物溶液浓度按照T4线、T3线、T2线、T1线的次序依次递增，且包被有不同浓度4-氯苯氧丁酸—BSA偶联物包被原的总量刚好可与金标垫上的金标抗体完全中和，用以检测不同浓度的4-氯苯氧乙酸（4-D）农药残留，对照区包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。

本实用新型选择4-氯苯氧丁酸为4-氯苯氧乙酸抗体制备的半抗原，牛血清白蛋白（BSA）为载体蛋白，然后通过改良EDC法合成人工抗原4-氯苯氧丁酸—BSA。称取4-氯苯氧丁酸60mg，加入0.05MPB（PH11以上），搅拌使其缓慢溶解，之后调节pH值至7.2左右，加入60mg sulf-NHS，充分混合，再加入90mgEDC，搅匀，静置片刻，并将此反应液1小时内缓慢滴加到事先配好60mg9mlBSA溶液中，并4℃下搅拌反应物过夜，0.15M NaCl透析三天，5-6次左右，紫外分光光度计测紫外法测定和计算偶联物的结合比，得到适当结合比的4-氯苯氧丁酸-BSA偶联物，-20℃下冻存。