[实用新型]小鼠S100钙结合蛋白B酶联免疫吸附测定试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于涉及生物技术领域，具体而言，涉及小鼠S100钙结合蛋白B酶联免疫吸附测定试剂盒。

背景技术

S100钙结合蛋白B(S100B)由Moore等于1965年首先在牛脑组织中发现，S100B蛋白是S100蛋白的家族成员之一，属于EF-hand超家族，是一种分子量较小的酸性钙结合蛋白。主要由星形胶质细胞合成并分泌，但少突胶质细胞、小胶质细胞、神经元室管膜细胞、淋巴细胞、脉络丛上皮细胞也会少量合成S100B。

S100B蛋白被认为是一种钙传感器蛋白，通过钙离子信号转导途径在细胞增殖、分化、肌肉收缩、基因表达及细胞凋亡中发挥重要作用。S100B蛋白在脑、软骨、骨骼肌细胞的生长及修复过程中可激活细胞增殖与迁移，抑制细胞凋亡和分化；在颅脑损伤及神经变性过程中可活化星形胶质细胞；在心肌梗死后可调节心肌细胞的重塑；调节细胞内Ca2+的内稳态；在黑色素瘤及胶质瘤的发病过程抑制P53的磷酸化。S100B蛋白作为中枢神经系统损伤的重要血清学标志物研究得较为广泛。S100B蛋白作为星型胶质细胞活跃的标志物，对精神疾病患者尤其是精神分裂症患者的病情评估具有指导性意义。S100B蛋白对其他系统疾病也有着重要的研究价值。S100B蛋白的检测有助于多种疾病的诊断、病情进展评估、治疗检测及预后判断，有着更为广阔的应用前景。

S100B蛋白的检测主要采用免疫学方法，常用方法有放射免疫分析法(RIA)，免疫放射测定法(IRMA)，高效液相色谱法(HPLC)，荧光免疫法(FIA)，免疫组织化学法(IHC)，聚合酶链式反应法(PCR)，酶联免疫吸附试验(ELISA)。

RIA和IRMA由于存在放射污染和危害,常用核素的半衰期短,试剂盒稳定期不长及不易快速、灵活的自动化分析等诸多不足而应用受限。Wiesmann等建立的荧光双抗体夹心法灵敏度较高,可达到0.015μg/L,具有良好的可重复性,能实现自动化检测,但仪器设备价格昂贵,因此不易于普及。而使用免疫组织染色检测S100B虽然也可以测得μg/ml以上的含量，但由于现今免疫组织染色中还存在着一些问题，比如说组织固定问题，抗原修复问题以及阳性对照问题等，这些问题也严重制约了免疫组织染色方法的发展和普及；RT-PCR主要通过检测mRNA来预测S100B的量，需要使用荧光定量PCR仪，一次性投资大，价格昂贵，不适合一般实验室使用。

高效液相色谱法（HPLC）具有灵敏度高、准确性和重复性好等优势，但需要昂贵的仪器设备，而且检测过程繁琐、样本前处理的技术要求很高，难于操作。检测人员需要具备专业的检测技能和丰富的实验经验。

酶联免疫吸附测定（ELISA）检测技术是在RIA基本理论的基础上发展起来的一种非放射性标记免疫分析技术。利用抗原-抗体之间特异性的免疫反应识别生物液体中的靶分子，并利用酶-底物的显色反应定量的反应待测样本中靶分子的含量。由于其特异性强、灵敏度、操作简便及不需大型仪器等优点，现广泛用于生物样本的定量检测实验中。ELISA检测试剂盒中的关键因素是获得高特异性、高亲和力的单克隆抗体。目前小鼠是科研实验室最常用的实验动物，但由于S100B来源于小鼠，所以常规的小鼠单克隆抗体的制备方法在这里是行不通的。而大鼠单抗的制备则可以解决这个问题，同时大鼠抗体具有一些小鼠抗体不具备的特点，大鼠抗体分子的轻链95%为κ型。因此可以利用小鼠抗大鼠抗体Igκ-1a抗体，高度特异性地结合杂交瘤产生的Igκ-1a的单克隆抗体，然后达到去除宿主大鼠产生的非特异性Igκ-1b抗体的目的，从而分离纯化得到高纯度的抗体。

因此，有必要选用一种快速、简便能够定量且灵敏度、准确度和特异性高的方法来进行小鼠S100钙结合蛋白B的检测。

实用新型内容

本实用新型目的制备是小鼠S100钙结合蛋白B酶联免疫吸附测定试剂盒，其具备操作简便，成本低，稳定性好，可以满足普通实验室的要求的特点。为了实现本实用新型的目的，拟采用如下技术方案：

本实用新型一方面涉及一种小鼠S100钙结合蛋白B酶联免疫吸附测定试剂盒，包括酶标板，所述酶标板包括固相载体和包被层，其特征在于：所述固相载体上设置有多个微孔，所述包被层附着在所述固相载体的微孔表面，所述包被层是由小鼠S100钙结合蛋白B抗体和牛血清白蛋白依次涂布在所述固相载体的微孔表面上形成的复合层。

在本实用新型的一个优选实施方式中，所述的多个微孔是指96个微孔。

在本实用新型的一个优选实施方式中，所述的固相载体是聚苯乙烯试剂板。