[实用新型]一种蛭石草炭土生境下磷脂脂肪酸提取组合装置

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种蛭石草炭土生境下磷脂脂肪酸提取组合装置，尤其是适用于蛭石草炭土中微生物细胞中的磷脂脂肪酸的提取分离。

背景技术

磷脂脂肪酸是生物膜的主要组成成分之一，且它只存在于活体细胞中，因为生物体死亡后，磷脂会随着生物膜的降解而消失。故非常适合于对活体微生物群落结构的分析。目前它已经被广泛用于对森林土壤、草地土壤、庭院土壤微生物的研究(FrostegArd A.,BAAth E.(1996).The use of phospholipid fatty acid analysis to estimate bacterial and fungal biomass in soil.Biol Fertil Soils,22:59-65)。

磷脂脂肪酸提取的过程包括氯仿-甲醇单相萃取浸提、硅胶柱纯化、甲酯化、上机测样四步。目前，中国发明专利（公开号公开号CN1588048A和CN102798566A）已经阐述了土壤磷脂脂肪酸的提取方法，但是都没有对磷脂脂肪酸浸提装置进行详细说明。而磷脂脂肪酸浸提效果的好坏将影响硅胶柱纯化的效果，进而影响到样品纯度，最后影响磷脂脂肪酸的上机测试效果。

特别是在盆栽实验中，往往是以蛭石草炭土作为基质，以增加土壤的透气性和保水性。与森林土、草地土和庭院土相比，蛭石草炭土密度偏小，给磷脂脂肪酸的分离带来很大麻烦。目前采用分液漏斗提取蛭石草炭土中微生物细胞的磷脂脂肪酸时，无法将水相和有机相界面处的白色物质去除干净。申请人在实践中，针对提取过程中的水相和有机相不能完全分离的问题，特对提取分离装置进行简化改进，最终找到了适合该生境下微生物细胞磷脂脂肪酸分离的方法。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种蛭石草炭土生境下磷脂脂肪酸提取组合装置，该装置能够有效去除蛭石草炭土生境下水相和有机相分界面杂质的完全分离，从而弥补利用分液漏斗提取时的不足。

技术解决方案：

本实用新型包括：离心管、注射器、漏斗、三角瓶，三角瓶的瓶口处设有漏斗，漏斗内设有滤纸；所述离心管、三角瓶、漏斗外表面设有铝箔纸。

由于有机溶剂对普通塑料有溶解作用，这将影响后续的提取效果。因此在磷脂脂肪酸提取的第一步中采用聚四氟乙烯离心管（50ml）、一次性注射器、三角瓶（50ml）、漏斗和定性滤纸（直径15cm）组合装置协同浸提微生物细胞的磷脂脂肪酸。

进一步地用针管（安捷伦）小心吸掉离心管内的上清液，将下层有机相（带有杂质）利用带有滤纸的漏斗（滤纸直径要大，超过漏斗上沿为宜）避光滤到的三角瓶中，氮气吹干备用。

本实用新型的有益效果：本实用新型的磷脂脂肪酸提取设备不仅能有效解决蛭石草炭土生境下微生物细胞中磷脂脂肪酸提取过程中的有机无机分界不纯的问题，而且较采用分液漏斗提取相比，能一次性大批量处理样品，及大地提高了提取效率。

附图说明

图1为本实用新型离心管结构示意图；

图2为本实用新型注射器示意图；

图3为本实用新型结构示意图；

图4为现有技术利用分液漏斗分离后的质谱图；

图5本实用新型分离后的质谱图。

具体实施方式

本实用新型本包括：离心管1、注射器2、漏斗4、三角瓶5，离心管1采用聚四氟乙烯离心管，所述三角瓶5的瓶口处设有漏斗4，漏斗4内设有滤纸3；所述离心管1、三角瓶5、漏斗4外表面设有铝箔纸。

使用时，在聚四氟乙烯离心管1内装5g土样，加25ml氯仿、甲醇和磷酸缓冲液，按体积比氯仿：甲醇：磷酸缓冲液=1：2：0.8混合液充分浸润，于15℃下，避光振荡提取3h，然后置于冰箱4℃恒温提取12小时以上。接着向离心管1内再各加入7.5ml氯仿和柠檬酸缓冲液，置于冰箱4℃过夜静置分层。磷脂脂肪酸由于溶于有机溶剂，所以存在于下层的有机相中，从而与上层的缓冲液水相分离开来，然后用注射器2小心吸掉离心管1内的上清液，带有磷脂脂肪酸的下层有机相（还有少量白色杂质）则利用带有滤纸3的漏斗4避光过滤到的三角瓶5中，氮气吹干备用。实践结果请见实验结果附图4和5。